关于fluidot自动液体分装仪在生活饮用水总大肠菌群检测中的应用

关于fluidot自动液体分装仪在生活饮用水总大肠菌群检测中的应用

方案摘要：根据国家标准,生活饮用水中不应含有病原微生物； 生活饮用水应对微生物的几个指标总大肠菌群、大肠埃希氏菌、菌落总数。其中菌落总数不能超过100个ＣＦＵ／ｍＬ），总大肠菌群限值为不应检出。本方案利用多管发酵法，快速分装乳糖蛋白胨培养液达到检测出生活饮用水中的总大肠菌群数量。

方案详情：

1、 实验原理

经36℃±1℃培养24H，发酵乳糖产酸产气、经证实试验和革兰氏染色检测水中总大肠菌群的方法。

二、实验准备

1、培养基和试剂

① 乳糖蛋白胨培养液

② 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液

③ 伊红美蓝培养基

④ 革兰氏染色液

2、仪器与设备

① 培养箱：36℃±1℃

② 冰箱

③ 电子天平

④ 显微镜

⑤ 平皿：直径9CM

⑥ 试管

⑦ 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）FDT-SP01001

⑧ 无菌吸管：10 mL（具0.1 mL刻度）FDT-SP01010

⑨ 手动移液器：fluidot  1 mL  MSP1K

⑩ 电动移液器：fluidot   5 mL  FDT-1-1-5000

⑪锥形瓶

⑫小倒管

⑬载玻片

⑭吸头：1.5mL   FDT-1500-1-TSF

⑮灭菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直径90 mm。

⑯自动液体分装仪：fluidot  30001-PP

三、实验步骤

1、乳糖发酵实验

① 用无菌吸管或移波器吸取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中,取1ml 水样接种到10ml,单料乳糖蛋白陈培养液中,另取1ml,水样注人到9ml,无菌生理盐水中,混匀后取1mL(即 0.1m1,水样)注人到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,每一稀释度接种5管;对已处理过的出厂自来水,需经常检验或每天检验一次的,可直接接种5份10mL水样双料培养基,每份接种 10 ml水样。

② 检验水源水时,如污染较严重,应加大稀释度,可接种1mL、0.1mL、0.01 ml,甚至 0.1 mL、0.01mL、0.001mL,每个稀释度接种5管单料乳糖蛋白胨培养液,每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时,应作 10倍递增稀释后,取1ml,接种,每递增稀释一次,换用1支1 mL,无菌吸管。

③ 将接种管置于36℃士1℃培养箱内,培养24h士2h,如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸,则可报告为总大肠菌群未检出,如有产酸产气者,则按下列步骤进行。

2、分离培养

将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,于36℃士1℃培养箱内培养18h~24h，观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落进行革兰氏染色镜检:

----深紫黑色、具有金属光泽的菌落;

----紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落;

----淡紫红色、中心较深的菌落

3、 证实试验

经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,同时接种乳糖蛋白陈培养液,置36℃士1℃培养箱中培养24h士2h,有产酸产气者,即证实有总大肠菌群存在。

4、 实验数据处理

根据证实为总大肠菌群阳性的管数,查MPN表(见表3和表4),报告每100ml 水样中的总大肠菌群 MPN值。稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均为阴性时,可报告总大肠菌群未检出。