方案摘要
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参考标准 | 超分辨率荧光显微 |
超分辨率荧光显微成像技术在活细胞成像中的应用
1.采用蛋白质标签的STORM活细胞成像
2010年,Wombacher等将ATTO655和甲氧苄啶标签(trimethoprim tag,TMP-tag)耦联在一起,对活HeLa细胞核中的H2B蛋白进行标记,实现了20 nm分辨率的活细胞STORM成像,成功观察到细胞核内的核蛋白复合物中有H2B的存在,而这种细节结构利用衍射受限的技术是观察不到的(图1a)。2013年,Lukinavicius等将SNAP标签和近红外荧光团硅罗丹明SiR耦联在一起,标记到活U2OS细胞核中的H2B蛋白上用于STORM活细胞成像,观察到了H2B蛋白在细胞核中的分布(图1b).随后他们还进一步验证了SiR-SNAP的特性,证明它是STORM活细胞实验的优良探针。
图1 蛋白标签用于活细胞核H2B蛋白的STORM成像
2.基于膜探针的STORM活细胞成像
2012年,Shim等利用STORM实现了对活细胞中细胞器膜的超分辨成像,空间分辨率达到20~60 nm,已接近EM的分辨率水平.在该工作中,他们通过大量的实验,筛选出了适合对各种细胞器膜进行活细胞标记和STORM成像的膜探针,最终采用DiI标记细胞膜、MitoTracker Red标记线粒体膜、ER-Tracker Red标记内质网膜、LysoTracker Red标记溶酶体膜(图4a~d)。
在本研究中,研究者主要借助STORM超分辨率显微镜来研究活细胞成像,目前在国内,随机光学重建显微镜STORM已成功实现商用,有需要STORM成像技术进行实验研究的专家老师们,请文末填写问卷,即可预约获得 iSTORM 超高分辨率显微成像系统试拍服务~
力显智能现已发布的超高分辨率显微成像系统 iSTORM,成功实现了光学显微镜对衍射极限的突破,使得在20纳米的分辨率尺度上从事生物大分子的单分子定位与计数、亚细胞及大分子复合物结构解析、生物大分子生物动力学等的研究成为现实,从而给生命科学、医学等领域带来重大突破。
参考文献
【应用实例】使用随机光学重建显微镜STORM对皮质下白质进行超分辨率成像
【应用实例】超分辨率显微镜在观察革兰氏阳性菌的细胞外囊泡生物中的应用
用STORM成像揭示细胞间隧道纳米管(TNTs)的结构和组织
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