供货周期: | 现货 |
品牌: | 明日达 |
货号: |
牛布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒(Bovine Brucellosis Antibody Test Kit)
用于检测牛血清中的布鲁氏杆菌特异性抗体,用于牛的血清学诊断。
规格:1板/2板
【试剂盒组分】
包被板 | 1板/2板 | 终止液 | 12 mL |
酶结合物浓缩液 | 0.24 mL | 阴性对照 | 0.1 mL |
酶结合物稀释液 | 24 mL | 阳性对照 | 0.1 mL |
20×浓缩洗涤液 | 30 mL | 血清稀释板 | 1块/2块 |
样本稀释液 | 60 mL | 盖板膜 | 1张/2张 |
底物A液 | 12 mL | 说明书 | 1份 |
底物B液 | 12 mL |
【试剂盒有效期】
2~8℃避光保存,有效期为12个月。
【需自备的材料】
微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm)、去离子水、离心机(4000 rpm)、恒温培养箱(25℃)、计时器等。
【注意事项】
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温(至少40 min),使用后放回2~8℃保存。
2. 不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。
3. 底物液不能暴露于强光或接触氧化剂。
4. 必须使用符合药典规定的水(如蒸馏水、去离子水或纯水)稀释洗涤液。
5. 待检血清数量较多时,应先稀释完所有待检血清,再加到酶标板上,使反应时间一致。
6. 终止液为强酸,若不慎溅到皮肤上请立即清洗。
7. 移液时,应尽量准确,防止产生气泡。
8. 应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。
【操作方法】
一、试剂配制
洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5~10 min),然后用蒸馏水作20倍稀释(例如:30 mL的浓缩洗涤液加上570 mL蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。
二、样品处理
1. 取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm离心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。
2. 在血清稀释板中按1:50稀释阴、阳性对照品和待检血清样品(如245 ?L样本稀释液中加5 ?L待检血清样品),充分混匀。
三、操作步骤
1. 取包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100 ?L加至抗原包被板中。同时设阴性对照2孔、阳性对照2孔,取稀释好的阴性、阳性对照各100 ?L分别加入反应孔中,轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)温育30min。
2. 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300 ?L,静置30 s后,弃去洗涤液。洗涤4次后在吸水纸上拍干(必须充分拍干)。
3. 配制酶结合物工作液:按体积比1:100(1份酶结合物浓缩液+99份酶结合物稀释液)混匀。
4. 每孔加酶结合物工作液100 ?L,盖上盖板膜,室温(25±2℃)下温育30 min。
5. 弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同2。
6. 将底物A液与底物B液按1:1混合均匀,加入孔中,100 ?L/孔,盖上盖板膜,室温下反应10 min。
7. 每孔加入终止液50 ?L,5 min内测定结果。
【结果判定】
在酶标仪上读各孔OD450nm值。
试验成立的条件是:
阴性对照平均OD450nm值<0.20且阳性对照平均OD450nm值≥1.0,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。
计算方法:
S/P= | 样品OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值 |
阳性对照平均OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值 |
阴阳性判断:
S/P<0.08时,判为阴性;S/P≥0.1时,判为阳性;0.08≤S/P<0.1,判为可疑。
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