利用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD 二苯基亚 2 μm 色谱柱分析 IgG1 中的二硫键 (PDF)

2022/11/14   下载量： 0 次

方案摘要

方案下载
应用领域 制药/生物制药
检测样本 治疗类生物药品
检测项目 特殊物质和基团
参考标准 .

本应用简报报导了一种简易的反相 HPLC 方法，用于分析单克隆抗体 (mAb) 中的二硫键。其中通过 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD 300 二苯基亚 2 μm 粒径色谱柱实现分离。在完整蛋白质及肽段消化物的反相分离中，二苯基 1.8 μm 色谱柱能够提供 UHPLC 级别的性能。当与 UHPLC 仪器联用时，这种通用型色谱柱可在更短的分析时间内获得更全面的表征结果。1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统的耐压能力高达 600 bar，能够承受采用更低粒径（低至 1.7 μm）的新型色谱柱技术所要求的更高压力。

方案下载
配置单
方案详情

虽然近年来重组 mAb 疗法取得了很大的 发展，但是关于它们的二硫键模式，人 们所掌握的信息很少。研究 IgG1 抗体中 完整的二硫键分布极具挑战性，这是由于 它们的分子量很大，并且二硫键的数目很 多。对于治疗性单克隆抗体 (mAb)，二 硫键是保持免疫球蛋白 (IgG) 三级和四级 结构的关键因素。在 mAb 生产过程中， 链间和链内的二硫键均在表达宿主细胞内 形成，然后进行分泌和纯化。之前的报 道指出，对于 IgG2 及二硫化介导的 IgG4 臂交换，二硫键会发生重排，反映出这 些 IgG 类型的一种固有行为1, 2。但是， 已有报道观察到 IgG1 中的二硫键数目呈 现出不规则的显著降低3，这对于治疗性 mAb 的生产而言是一个很重要的问题。本 应用简报证实了 1260 生物惰性四元泵液相 色谱系统适用于 IgG1 中二硫键的分离和分 析，该系统采用反相 HPLC 方法和ZORBAX RRHD 300 二苯基，2.1 × 100 mm，1.8 µm 粒径色谱柱。采用亚 2 µm 粒径色谱柱的 超高效液相色谱 (UHPLC) 分离，可改善每 次分析的分离度和灵敏度，缩短分析时间， 并且可用于分析 IgG1、还原态 IgG1，以 及 IgG1 消化产生的肽段。

上一篇 用高分离度快速液相色谱-UV 和 MS 检测建立可靠的中药制剂质控方法 (PDF)
下一篇 采用Agilent Bio MAb NP5 色谱柱分析完整和羧基末端消解的IgG1 (PDF)

文献贡献者

天津市普伦科技开发有限公司
银牌会员 丨 第2年
查看全部资料
相关仪器 更多
相关方案
更多

相关产品

当前位置： 天津普伦科技 方案 利用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD 二苯基亚 2 μm 色谱柱分析 IgG1 中的二硫键 (PDF)

关注

拨打电话

留言咨询