方案摘要
方案下载应用领域 | 制药 |
检测样本 | 治疗类生物药品 |
检测项目 | 其他>方法开发 |
参考标准 | . |
本应用简报证实,使用配备新型 HILIC 色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪,可对人免疫球蛋白 G 的 N-连接糖链进行灵敏、重现的分析。对人 IgG N-连接糖链文库分析的保留时间和峰面积精度进行测定。此外,对于具有低检测限和低定量限的五种糖链标准品(M5、A2G2、A2G2S1、FA2G2S1 和 A2G2S2)混合物,在 0.016-1 pmol 的范围内具有良好的线性。 配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μm 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱仪是一款出色的系统,可实现灵敏且重现的2-AB 衍生人免疫球蛋白 G 释放 N-连接糖链分析。
抗体代表一大类重组的治疗性蛋白 质,是一种主要的药物类别。此类 治疗性药物的疗效高度依赖于正确 的糖基化模式。目前,获批的所有治 疗性单克隆抗体 (mAb) 均为免疫球蛋 白 G (IgG)1 。对其糖基化模式的分析 是 QA/QC 流程中一个重要的环节。此 外,来自血浆的人 IgG 的糖基化模式 可以反映患者的健康或疾病状态2 。 人 IgG 中有一个单独的保守 N-连接糖 基化位点,位于每条重链 Fc 段的 Asn297 处3 。因此每个 IgG 可连接具有高 异质性的两个糖基,并可产生含至少 30 种糖型的混合物1 。来自血浆的人 IgG N-连接糖链主要为二分支复合型 结构,主要由零至两个半乳糖残基以 及一至两个唾液酸进行核心岩藻糖基 化。此外,人 IgG 携带少量的二分支 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc) 残基。一 般来说,重组产生的 mAb 具有稍简单 的模式,不具有非岩藻糖基化或二分 支 GlcNAc 糖链结构4 。 这种 mAb 中还发现了甘露糖-5 等其他 更不成熟的高甘露糖结构,大多数量 较少5 。 由于复杂生物样品的糖基化分析得到 的丰度通常很低,因此蛋白质糖基化 模式的分析极具挑战性。使用亲水相 互作用液相色谱 (HILIC) 联用带荧光检 测器的 HPLC 分离 AB 标记的糖链结 构,是一种可靠且灵敏的糖基化分析 方法6 。本应用简报使用这种方法来测 定精度、线性和灵敏度。
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