治疗类生物药品含量测定>色谱法检测 | 利用 HPLC 及 Q-TOF 质谱仪分析聚乙二醇及单、二聚乙二醇化的治疗性蛋白 (PDF)-天津市普伦科技开发有限公司

方案摘要

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应用领域	制药/生物制药
检测样本	治疗类生物药品
检测项目	含量测定>色谱法
参考标准	.

聚乙二醇化的多肽和蛋白质为生物治疗药物的详细结构表征带来重大挑战，这主要是由于聚乙二醇 (PEG) 具有异质性。本应用简报描述了一种联用 Agilent HPLC 及 Agilent 6520 精确质量数 Q-TOF LC/MS 系统分析聚乙二醇及聚乙二醇化蛋白的方法。其使用了一种电荷剥离剂（三乙胺）作为柱后添加剂，这样有助于简化质谱图，因此可更好地阐释结果。结果表明聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白质的质谱图质量均得到显著改善。

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配置单

二手翻新安捷伦1260液相色谱仪
型号：1260

¥20万
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方案详情

液相色谱/质谱 (LC/MS) 技术在蛋白质表征方面功能强大、灵敏度高。在蛋白质药物的监管审批中，采用 LC/MS 方法来进行定性和定量分析。聚乙二醇化是生物制药业中一种重要的共价修饰方法，可提高蛋白的治疗功效。1 聚乙二醇化过程指的是聚乙二醇与治疗性蛋白的化学结合。这种修饰可以增加蛋白药物的半衰期。但由于聚乙二醇分子本身的异质性，聚乙二醇化修饰可导致产品的异质性。因此，在产品发布前分析聚乙二醇试剂及聚乙二醇化蛋白药物非常重要。本研究中，我们通过联用 Agilent 1260 Infinity LC 及 Agilent 6520 Q-TOF 质谱仪对完整的聚乙二醇化治疗性蛋白样品和聚乙二醇试剂进行分析。聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白从 HPLC 分离及洗脱出来，而电荷剥离剂三乙胺 (TEA) 由一个注射泵通过三通接头导入，如图 1 所示。2,3 作为一个电荷降低试剂，TEA 在进入质谱仪前与聚乙二醇化蛋白样品混合。胺类化合物的添加可改善质谱图，有助于结果解释。结果表明所研究的聚乙二醇化治疗性蛋白与聚乙二醇试剂一样，都具有异质性。聚乙二醇化后，完整蛋白分析显示出多重峰，每个峰之间的质量偏移约为 44 Da，为乙二醇的质量。

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文献贡献者

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