科晓推荐安捷伦1120系列检测三聚氰胺方法

安捷伦强阳离子交换柱/高效液相色谱快速测定 牛奶及奶粉中的三聚氰胺

仪器配置：
液相色谱仪
安捷伦1120液相色谱仪：单元泵梯度泵、标准自动进样器、柱温箱、紫外检测器
乙腈为迪马公司HPLC级乙腈
超纯水为经Milli-Q系统净化处理过的纯净水
1. 色谱柱：
ZORBAX 300SCX 4.6×150mm，5um；

检测三聚氰胺的方法主要包括LC、LC/MS和GC/MS方法。在液相色谱中，由于三聚氰胺极性强，在反相柱上难以保留，FDA方法采用反相离子对模式来加强保留，但离子对模式对色谱柱的损伤大、平衡缓慢，且不适宜液质联用。本文采用ZORBAX SCX强阳离子交换谱柱分离和检测三聚氰胺样品，流动相中不需加离子对试剂，获得了理想的保留和分离。

图1. 三聚氰胺结构式

1.实验及方法

1.1仪器
本实验使用安捷伦1120高效液相色谱系统
1.2 试剂与标样
乙腈为HPLC级乙腈
超纯水为经Milli-Q系统净化处理过的纯净水
三聚氰胺标准贮备液：浓度1mg/mL，溶剂为乙腈/水（1：1）
标准工作液：逐级稀释三聚氰胺标准贮备液，以乙腈/水（1：1）定容，制成浓度分别 为0.5ug/mL, 1.0ug/mL, 5.0ug/mL, 10ug/mL, 50ug/mL, 100ug/mL的标准工作液
1.3 样品制备
准确称取约5g样品，加入50mL乙腈/水（1：1），涡旋混合，用0.45μm的滤膜过滤。
1.4色谱条件
色谱柱为ZORBAX 300SCX 4.6×150mm，5um；检测波长为240nm；流速：1mL/min；柱温 30℃；进样量为10μL。
流动相配制：首先配制50mmol/L 甲酸铵溶液，用甲酸调节pH值至pH=3.0；而后按15：85的比例分别量取一定体积的甲酸铵缓冲液和乙腈，混合均匀后使用。
2．结果与讨论
2.1 保留与峰形
ZORBAX 300SCX为硅胶基质苯磺酸键合硅胶填料，除了具备阳离子交换能力，键合相中的苯环结构也提供一定反相作用机理，本方法开发过程中主要从水相的缓冲盐浓度、pH、水相/有机相比例等方面进行了精心优化，获得了良好的保留和柱效。图2为10ug/mL三聚氰胺标样色谱图，计算得到USP拖尾因子Tf=0.97,理论塔板数为14,11。
2.2 线性范围与检出限
以0.5ug/mL, 1.0ug/mL, 5.0ug/mL, 10ug/mL, 50ug/mL, 100ug/mL标准工作液绘制标准曲线，得到线性回归方程y = 15.054x，相关系数R2 = 0.9998。计算检出限约为0.05ug/mL，实际分析0.05ug/mL标样，信噪比3.9（图2）。
2.3 实际样品分析
离子交换模式对可离子化目标化合物具有很好的选择性，本方法考察了未经SPE净化处理的奶粉样品（图5）。如图可见，样品中的基质干扰物在SCX色谱柱上很少保留，多在前面流出，且三聚氰胺与其附近的一主要干扰峰的分离度很好，非常有利于三聚氰胺准确定量。

                                                        图2. 奶粉样品谱图

3 结论
本方法采用ZORBAX 300SCX强阳离子交换色谱柱分析三聚氰胺，在不含离子对试剂的简单流动相下能够很好地控制三聚氰胺的保留；且该方法对三聚氰胺的选择性好，实际样品即使不经过SPE净化，也可获得三聚氰胺与基质干扰物的良好分离，为奶制品中的三聚氰胺检测提供了一个的快速、简便而可靠的液相新方法。

备注：

本检测方法是与我公司推荐的检测奶粉中三聚氰胺豪华版完美结合，做到检测的稳定和准确。订购豪华版的用户可参考此方法对三聚氰胺进行检测。

详细配置清单

1套 液相色谱仪 Agilent 1120/4287AA(单泵+柱温箱+自动进样器+中文软件)
1支 液相色谱柱 Zorbax 300SCX 150*4.6/5um
1瓶 三聚氰胺标准品 100mg 99.5%
1台 超声波清洗器 KQ-2200(3L)
1台 溶剂过滤器 M-50/DL-01(1000ml)
1盒 有机系针式样品过滤器 Φ13mm*0.45um(100只/包）
1盒 有机系微孔滤膜（偏氮膜） Φ50mm*0.45um(100片/盒）

附赠
三聚氰胺分析方法手册 1 份


另购 
甲酸胺(AR级) 瓶 1
甲酸(AR级) 瓶 1
高纯乙腈 瓶 1 

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