微滴式数字PCR应用于微小残留病检测

　　2018年12月1-4日第60届美国血液学年会(ASH)暨博览会在美国加州圣迭戈举行。每年的美国血液学年会是全世界血液学研究者的盛会。年会上公布和发表世界各国的最新血液学的研究进展。本次会议中的一些研究强调了微滴式数字PCR(ddPCR)灵敏度高和准确性高的特点，对微小残留病(MRD)的量化是一个强有力的工具，以下摘选了几个报告的重点内容：

　　01

　　ddPCR应用于治疗TP53突变的MDS和AML的1b期临床试验

　　佛罗里达州Moffitt肿瘤研究中心的血液肿瘤学家David Sallman博士介绍了一项临床试验的结果。Sallman博士及其团队研究了阿扎胞苷(一种化疗药物)与小分子药物APR-246的联合用于治疗具有TP53突变的骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓性白血病(AML)的患者。前期数据已经表明，单独使用阿扎胞苷可使20-30%的TP53突变的MDS和AML患者完全缓解。当加入小分子药物APR-246后，这些患者的完全缓解率达到了82%，这比单独使用阿扎胞苷具有更显著的疗效。研究人员使用NGS与ddPCR的方法量化MRD来分析缓解深度。Sallman博士说到“在我们的试验中，我们发现ddPCR在定量患者特异性缓解深度方面具有显著的效果”。

　　Sallman博士指出，该临床试验的第2阶段将继续使用ddPCR作为确定缓解深度的方法之一，也将会用于阿扎胞苷与APR-246联合治疗患者的预后评估。

　　02

　　ddPCR有助于预测AML患者的缓解

　　同种异体造血干细胞移植(HSCT)是AML等血液系统恶性肿瘤的治愈方法之一。但是在移植后，许多患者会出现复发。科罗拉多大学和科罗拉多儿童医学的Amanda Winters博士和她团队利用ddPCR检测MRD以预测哪些患者可能在HSCT后会产生复发。虽然先前的实验已经证实MRD对化疗后的患者复发具有高度预测性，但很少有研究评估MRD在患者HSCT后复发的预测能力。

　　该团队使用ddPCR跟踪检测36名患者的21种AML相关突变，36名患者均接受了骨髓移植并同意组织样本库协议，在诊断时至少被检出具有21个突变中的一个。研究发现，基于ddPCR的MRD评估可预测AML患者HSCT后的复发和存活。移植后1个月时，MRD的存在与复发率和死亡率显著相关。基于这些发现，Winters博士和她的团队认为骨髓移植后利用ddPCR检测AML的相关突变可以帮助医生更早地发现疾病的复发。

　　03

　　ddPCR定量MLL融合转录本监测MLL-r AML的MRD

　　目前实时定量PCR(RQ-PCR)是MLL重排(MLL-r)白血病患者MRD监测的标准方法。然而，当只存在少量白血病细胞时，这种方法就显得不够精确了。来自澳大利亚昆士兰大学的Sadia Afrin博士及其团队评估了使用ddPCR定量MLL融合转录水平是否可以提高MLL-r白血病患者MRD检测的灵敏度。

　　首先对44名MLL-r AML与ALL患者进行测序，确定每个患者特异性的融合序列，然后设计对应的融合检测探针用ddPCR进行MRD的评估，样本同时采用RQ-PCR的方法进行平行检测。将ddPCR与RQ-PCR检测的结果进行比较，遵循EuroMRD的指南。

　　结果显示ddPCR法表现出更高的检测灵敏度与可靠性，其中4个低于EuroMRD指南RQ-PCR检出阴性的样本均可用ddPCR检出，显示出ddPCR比标准的RQ-PCR法可提供更稳定且更高灵敏度的MRD分析结果。

　　Afrin博士认为ddPCR是一种很有前景的技术，可以准确、灵敏地定量MLL融合转录本，监测MLL-r白血病的MRD。ddPCR的高灵敏度和高稳定性可以改善基于反应的治疗分层以及预测复发。