氨基酸的存在形态
氨基酸在生物体中主要有两种形态存在:一种是游离氨基酸,以游离态存在的单个氨基酸分子,可被直接吸收利用;另一种是水解氨基酸,需要将待检产品中的蛋白质、多肽等氨基酸链水解成单个氨基酸,因此,水解氨基酸反映的是产品中所有氨基酸单位(单个或多个)的组成。
水解氨基酸的前处理方法
确定蛋白质的氨基酸组成需要两个步骤:
*步水解,即将蛋白质肽键打开,释放出单个氨基酸,然后进行回收。分析样品的多样性造成了样品前处理的复杂性。有研究显示,水解的不合理是影响氨基酸分析正确性的首要原因。
第二步分析,即利用色谱技术对水解产物进行定性和定量分析,以确定氨基酸的种类及其含量。
由于氨基酸回收的复杂性,需要针对不同类型的氨基酸来选择适合的水解方法,主要有酸水解、氧化水解、碱水解、和酶水解。以下针对较常用的酸水解进行介绍。
酸水解法
酸水解法是氨基酸分析中较常用的前处理方法, 22种α-氨基酸中大多数可采用酸水解法,即用6M高纯度的盐酸将蛋白质裂解成单个游离氨基酸,随后把残留的盐酸蒸发去除。
水解过程中使用6M HCl进行水解22-24小时,水解后的氨基酸需要取1-2ml溶液放在真空离心浓缩仪中浓缩蒸干,加入2ml水后就继续浓缩蒸干,重复两次上述操作,以保证去除盐酸。高浓度盐酸去除时,由于盐酸的强腐蚀性,常规的浓缩仪的管路、真空泵、腔体等部件容易被腐蚀,所以一款真正耐盐酸的浓缩仪是减少实验室成本的关键。
耐强酸的溶剂蒸发工作站
市面上的浓缩设备有很多种,但真正能耐受高浓度盐酸、硝酸和TFA的设备却不多见。Genevac EZ-2 4.0溶剂蒸发工作站不仅能耐受6M盐酸,还能实现无人值守、自动停机等功能。
Genevac EZ-2 4.0
耐盐酸的核心:
1、方便替换的金属全部由哈氏合金或玻璃替代;其余均用特氟龙密封工艺处理;
2、离心腔、样品架都通过PTFE密封工艺进行阳极氧化处理;
3、聚四氟乙烯制造的蒸汽截止阀和波纹管;
4、真空出口连接器采用聚丙烯制造;
5、密封圈采用杜邦Kalrez全氟醚橡胶,可耐强酸强碱。
其他优势:
● Sample Guard™ 控温系统,防止样品过热;
● Dri-Pure®防暴沸功能:防止样品暴沸产生交叉污染,避免样品损失;
● 样品容器兼容性强、通量高:多种转子可选;
● Sample Genie样品转移功能:浓缩后可直接将样品转移至GC小瓶内上机测试,无需二次转移;
● 无人值守,自动停机。
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