层浪流式笔记——肺癌PD-1免疫检查

实验简介

PD-1，全称为“程序性死亡受体1”，又称为CD279，是一种重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下调免疫系统对人体细胞的反应、抑制T细胞炎症活动，调节免疫系统并促进自身耐受。PD-1发挥功能可以预防自身免疫性疾病，但也会阻止免疫系统攻击癌细胞，造成肿瘤进展。通过流式细胞技术检测PD-1表达，可以反映肿瘤进展情况。多项研究显示，PD-1在肿瘤患者的外周血CD8+T细胞表面过表达，并与患者的病理变化及临床疗效密切相关。CD8+PD-1+T 细胞在癌患者外周中的比例明显增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T细胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 细胞中的应答水平发生改变,并与患者疾病的进展密切相关。

实验材料与方法

检测方案：

样本制备：

1. 消化酶制备单细胞悬液，并过滤；

2. 裂解红细胞，1 mL 1X RBC裂解红细胞,室温10 min(根据厂家推荐)；

3. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；

4. 可重复步骤3；

5. 染色：根据厂家推荐用量进行染色，室温避光孵育20 min；

6. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；

7. 加入200-300 ul染色缓冲液，重悬后上机检测。

实验结果：

圈门逻辑：

肿瘤组织中先圈出白细胞的信号CD45+（图A），再圈总的CD3+T细胞（图B），再分别看CD4（图C）、CD8（图D）、NK和NKT（图E）在淋巴细胞中的占比，最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T细胞的双阳信号（图F）。肿瘤组织中淋巴细胞的占比会下降，特别是发展到后期，白细胞整体降低，PD-1在CD3+T中信号明显。PD-1在CD8+T细胞中表达水平较低。

结果分析总结:

肿瘤组织中，淋巴细胞亚群倾向百分比降低、分群不明显，但是此次检测T细胞分群基本明显。