【飞诺美色谱】眼药中SQ-756的分析方法

概述

本实验运用Cleanert PCX 96 Wellplate结合Luna C8（2） （4.6×250mm 5μm）色谱柱进行检测，样品经乙腈提 取后，Cleanert PCX 96 Wellplate净化。结果表明，PCX 小柱可以有效去除辅料影响，杂质11相对回收率95.7%， 杂质16相对回收率84%，主峰相对回收率90%。

关键词

Luna C8；Cleanert PCX 96 Wellplate

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

超高效液相色谱仪(岛津 LC-20A)；

3.1.2试剂材料

微孔滤膜：0.22 μm PTFE滤膜

Cleanert PCX 96 Wellplate：CX00501-MW

实验用水为屈臣氏水；乙腈、三氟乙酸均为色 谱纯试剂。

3.1.3 样品: 由客户提供；

3.2样品前处理方法

称量：准确吸取0.5mL样品2mL离心管中，加 200μL杂质16；

提取：准确加入0.5mL 乙腈，涡旋60s， 10000r/min，离心5min，上清液待净化；

活化：1mL乙腈活化小柱

净化：将提取的上清液全部加载到小柱上，接 流出液，真空抽干小柱。

过滤：流出液以10000r/min，离心5min，过 0.22 μm PTFE滤膜，上机检测。

3.3仪器检测条件

3.3.1色谱条件

色谱柱：Luna C8 4.6×250mm 5μm； P/N：00G-4249-E0

流动相：A：乙腈-水-10%三氟乙酸（410： 590：1）；

B：乙腈-10%三氟乙酸（1000：1）

流 速：1.0 mL/min；

柱 温：60 ℃；

进样量：50 μL；

梯度程序见表2：

3.4结果与讨论

3.4.1原始溶液的制备

准确吸取样品0.5mL，加入0.5mL乙腈及200μL杂 质16，涡旋60s，10000r/min，离心5min，过0.22 μm PTFE滤膜，上机检测。

3.4.2方法精密度与准确度

以原始溶液中对应物质峰面积为标准，经 Cleanert PCX 96 Wellplate净化后对应物质峰面积与 之相比得到相对回收率，结果见表3。实验谱图见图 4~图6。

3.4.3讨论

由于空白辅料影响较大，本实验考虑利用SPE技 术将辅料去除。本实验筛选了PWCX、PWAX、 PAX、PCX小柱，空白辅料峰在C12出峰时间为 14.063，C14出峰时间为26.093，由下图可知除PCX 小柱外，其余小柱无法满足要求。

由于杂质16及主峰的相对回收率偏低，实验过 程中尝试增加一步乙腈淋洗步骤来确保小柱上没有 主成分残留，但在氮气浓缩过程中，主峰发生变 化，裂变成两个峰，干扰分析，最后决定去掉淋洗 步骤保证主峰正常。

3.4实验谱图

结论

本实验运用Cleanert PCX 96 Wellplate结合Luna C8（2） （4.6×250mm 5μm）色谱柱进行检测，样品经乙腈提 取后，Cleanert PCX 96 Wellplate净化。结果表明，PCX 小柱可以有效去除辅料影响，杂质11相对回收率95.7%， 杂质16相对回收率84%，主峰相对回收率90%。