反相离子对色谱法建立的注意事项（二）

月旭科技（上海）股份有限公司

今天小编再给大家分享一些注意事项：

方法调整

有机相，pH值，进样量，柱温等。

有机相

案例

色谱条件

色谱柱：月旭Ultimate^®XB C18（4.6×250，5μm）。

流动相：A相：磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钾6.8g/L，磷酸调整pH=2.5）；

B相：甲醇/乙腈/四氢呋喃；

检测器：280nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：10μL；

样品溶剂：A相；

样品溶液：L-去甲肾上腺素、肾上腺素、L-酪氨酸、多巴胺用溶剂配置成浓度均为：0.2mg/mL。

B相：6%乙腈

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B相：10%甲醇

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B相：2.5%四氢呋喃

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讨论：在使用相似洗脱能力的有机相比例的情况下，同时检测L-去甲肾上腺素、肾上腺素、L-酪氨酸、多巴胺4种物质，常用的甲醇，乙腈，四氢呋喃三种有机溶剂具有不同的分离结果，可以根据表《溶剂的选择性特征》进行筛选。

pH值

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讨论：针对于易解离的物质，不同的pH会导致物质的解离程度不一样，进而引起保留时间的差异，反相离子对色谱法中需要物质成为统一的解离状态。

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