想做制备液相,但无从下手,
拿到了小试结果,可不知道怎么放大,
制备结果不符合预期要求却不知道原因,
这是为什么呢?
那么,我们一起来往下看吧……
大家都知道,制备型(Prep)色谱是以分离、富集和纯化为目的,以供进一步使用。
通常为了进行有效的制备型分离,需要了解如下信息:
1.组成
样品大概有多少个组分;
分离的目标组分有哪些(一定要明确);
2.纯度
目标组分的纯度要求是多少;
对于制备型分离,对产品通常都有一定的纯度要求,也就是说并不是所有的分离都要求产品纯度达到100%,目标组分只要能达到我们具体的科研或是生产的纯度要求就可以了。如微量的天然产物将其富集到大约70%的含量就可以进行初步鉴定;供核磁及红外测试的样品纯度只要达到95%左右就可以达到要求;做定量分析用的标准品其含量至少要在99%以上;而一些生物活性物和一些生物活性物质只需要除去其中的有害成分,并且它们的纯度并不用含量来表示,而是用活力这个概念。只有了解产品纯度的要求,我们才能在制备型分离中,建立起合适的方法。
3.复杂性
干扰物质有哪些(尽可能了解,便于复杂样品的前处理);
4.性质
样品的物理或化学性质(化学结构、溶解性、酸碱性、化合物的检测方式);
目标组分的物理或化学性质(同上);
对于目标组分,如果是未知化合物,则需要了解大致有哪些特征的官能团,如羟基、羧基、氨基、苯环、含氮杂环等,最终的目的都是了解化合物的极性大小(logP值)和化合物的酸碱性(pKa值)。这两个参数往往决定了在制备液相色谱方法开发中固定相和流动相的类型。
5.价值
原料是否易得、是否昂贵;
所分离的目标物价值又如何?
只有掌握了样品的这些初步情况,才能使我们后面分离方法的建立有的放矢,选择合适的固定相和流动相,挑选一只分析柱(如4.6mm*250的分析型柱子,使用10μm的制备级填料)进行方法摸索,并进行优化。
优化步骤可以简单的归纳如下:
选择最佳的高效液相色谱分离条件
在分析型的设备条件下
摸索制备型分离方法
放大到制备型的规模上
进行制备型分离
收集馏分
在分析型的液相色谱仪器上
检测产品纯度,
如果不符合要求,重新在分析型
液相色谱仪器上改进分离条件
合并相同组分
如果有需要的话,
可以再进一步提纯产品
收集目标物
看到这,有的小伙伴可能有疑问了,为什么不直接在制备柱上去摸索呢?因为直接在制备柱上摸索条件,规模变大,如果方法条件不合适,没有获得希望的纯度,会造成样品和试剂的多种浪费,时间长了还容易造成制备柱的损坏。需要注意的是,依据分析柱上摸索的方法,最好选择与分析柱相同品牌的填料的制备柱,以免摸索好的方法在制备柱上无法重现。
下图为几款月旭科技用于小试和中试的WelPackerDAC动态轴向压缩柱产品。
不同内径的制备柱都有自己载样量范围。如果上样量过小,则洗脱效率降低;如果上样量过高,则样品在柱内过载,可能与杂质无法得到有效分离即被直接洗脱流出。这里需要说明一点的是,由于大多数的制备型色谱都是在适量过载的情况下工作的,而在该条件下色谱柱的柱效是呈指数下降的,对于制备色谱柱过分追求小粒径填料是得不偿失的,如5μm粒径填料的成本比10μm粒径填料高好多。
制备色谱柱的使用寿命主要取决于柱子的质量、样品的性质和干净程度。对于高价值的DAC来讲,延长柱子寿命是很重要的。一般来说,DAC需要配套制备型在线过滤器防止颗粒物堵塞制备柱。
下图为几款月旭科技常见的制备型在线过滤器。
月旭科技提供专业的方法开发,提供量身定制整体制备色谱解决方案,以满足复杂的探索和业务需求,帮助您发现新方法来克服操作和数据挑战。
第九届色谱网络会议,共探色谱分离材料最新进展
电商秒杀,再度来袭!月旭UHPLC色谱柱钜惠,历史最低
秉承奥运精神,强健体魄!月旭销售部24年首期健身活动圆满成功
高温、雷电、暴雨!液相色谱仪新增注意事项速看
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询