方案摘要
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参考标准 | 液相色谱仪 |
甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)是二氢叶酸还原酶抑制剂,是通过抑制细胞内二氢叶酸酶达到杀灭肿瘤细胞的作用。目前临床采用大剂量甲氨蝶呤配合亚叶酸钙解救(HD-MTX+CF)治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)。 检测仪器:高效液相色谱仪(色谱工作站,SPDiOA—VP紫外检测器);旋涡混合器;台式离心机。
甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)是二氢叶酸还原酶抑制剂,是通过抑制细胞内二氢叶酸酶达到杀灭肿瘤细胞的作用。目前临床采用大剂量甲氨蝶呤配合亚叶酸钙解救(HD-MTX+CF)治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)。有研究表明,ALL患者MTX血药浓度与不良反应和疗效之间存在密切关系且个体差异大。
为了安全有效地实施HD-MTX给药,监测MTX用药后的血药浓度尤为必要,以确保临床用药安全有效。目前测定MTX血药浓度的方法有荧光偏振免疫分析法、高效液相色谱法(HPLC)、LC-MS法等。荧光偏振免疫分析法成本昂贵,且专一性差,难以推广,而且由于代谢产物的存在抗体可能交叉反应使测定结果偏高。国外采用LC-MS法测定MTX血药浓度虽专一性较强且灵敏度高,但此方法费用高,操作复杂。而HPLC具有专属性高、灵敏、准确、适用性强等优点,更适合广泛应用。
检测仪器:高效液相色谱仪(色谱工作站,SPDiOA—VP紫外检测器);旋涡混合器;台式离心机。
色谱条件:色谱柱柱温为35℃;检测波长为303nm:流动相为乙腈-0.16mol/L乙酸钠水溶液(12∶88);流速1ml/min。
测定方法
对照品溶液制备:精密称取MTX对照品1.5mg置50ml容量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度,得30.0μg/ml的对照品储存液,置于4℃冰箱保存。使用时精密吸取适量对照品储存液加人血浆稀释至所需浓度。
血浆样品预处理:取样品血浆200μl,置于1.5mlEP塑料管中,加入50μl6%高氯酸液,沉淀血浆中的蛋白质,旋涡振摇2min,于4000r/min离心5min。
取20μl上清液进样,记录色谱图。
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