方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 预防类生物药品 |
检测项目 | 含量测定>色谱法 |
参考标准 | HPLC纯度95%以上 |
核酸药物以其疗效显著、开发周期短成为临床用药和新药研发市场的热点,而在药物研发阶段,样品的纯度需要符合要求,而在纯化环节,由于纯化工艺路径的差异,一般有两种方法可供选择。反相色谱法和离子交换层析法,而本文主要介绍了其中一种,反相色谱法。
SepaBean machine快速制备液相色谱系统
在核酸药物领域的应用
核酸药物是属于生物药品中的一类,是在疾病治疗过程中继化疗、放疗、手术治疗之后的一类全新的生物治疗方法。核酸药物包括小干扰 RNA、小激活RNA、微小RNA、信使RNA药物等。目前核酸产品已被广泛用于基础研究以及如肿瘤、感染性疾病、血液病及神经退行性疾病等疾病的临床诊断和治疗。其中以 mRNA 技术为代表的 mRNA 核酸疫苗在新冠病毒防疫中取得了巨大的成功。随着递送技术和RNA药物形式的多样化发展,核酸药物已经开启繁荣发展的时代,也被称为继化学药、抗体药后的第3代药物。核酸药物以其疗效显著、开发周期短成为临床用药和新药研发市场的热点,而在药物研发阶段,样品的纯度需要符合要求,而在纯化环节,由于纯化工艺路径的差异,一般有两种方法可供选择。反相色谱法和离子交换层析法,而本文主要介绍了其中一种,反相色谱法。
实验部分
实验设备:制备液相色谱系统是在使用反相色谱纯化时会用到的设备,搭配使用C18键合相填料可以满足实验室级别的核酸药物粗品的纯化工作。制备液相色谱系统已广泛应用天然产物、微生物发酵药物、化学合成药物以及多肽类药物等领域,满足纯化工艺开发需求。
实验样品:本案例采用的样品由某客户所提供,该客户目前主要从事核酸药物的研究。样品采用50%乙腈水进行溶解,采用C18键合相分离柱(SW-5201-025-IR)进行分离纯化。由于此类样品紫外吸收较弱,因此采用紫外与ELSD检测器联用模式对样品进行检测,降低样品损失。
制备方案:
表1. Flash制备实验参数
仪器 | SepaBean machine 2——专家型 | |
色谱柱 | SW-5201-025-IR | |
检测波长 | 波长1:254nm 波长2:280nm ELSD | |
上样量 | 500mg | |
流动相 | A:水、B:乙腈 | |
流速 | 15ml/min | |
洗脱梯度 | 时间/min | 溶剂B/% |
0 | 30 | |
12 | 75 | |
30 | 75 | |
40 | 95 | |
55 | 100 | |
70 | 100 |
结果与讨论:
波长1:254nm 波长2:280nm ELSD
图1. 样品制备纯化色谱图。
本实验样品经过分离纯化得到的色谱图如上图1所示,从上图1中可以看出组分1和组分2基本达到了基线分离,通过HPLC进一步检测其纯度,其纯度结果满足客户要求,可以进行下一步反应。本次实验结果表明三泰科技SepaBean machine快速制备液相色谱系统与ELSD联用搭配三泰科技SepaFlash分离柱可以应用于核酸药物领域的分离纯化,为核酸药物领域的样品分离纯化方案提供选择,为核酸药物领域的新药研发助力。
SepaFlash键合相分离柱订购信息
三泰科技推出的SepaFlash 键合相产品具有多种规格(参见表2)。
表2. SepaFlash键合相分离柱参数
(碳含量17%,封端,比表面积500m2/g,上样量0.1–2%)
产品编码 | 柱尺寸 | 上样量 | 包装规格(根/盒) | 流速(ml/min) | 柱长度(mm) | 柱内径(mm) | 最大工作压力(psi/bar) |
SW-5201-004-IR | 5.9 g | 5.9 mg–118 mg | 2 | 10–20 | 113.8 | 12.4 | 400/27.5 |
SW-5201-012-IR | 23 g | 23mg–0.46g | 1 | 15–30 | 134.8 | 21.4 | 400/27.5 |
SW-5201-025-IR | 38 g | 38 mg–0.76 g | 1 | 15–30 | 184 | 21.4 | 400/27.5 |
SW-5201-040-IR | 55 g | 55 mg–1.1 g | 1 | 20–40 | 184.4 | 26.7 | 400/27.5 |
SW-5201-080-IR | 122 g | 122 mg–2.5 g | 1 | 30–60 | 257.4 | 31.2 | 350/24.0 |
SW-5201-120-IR | 180 g | 180 mg–3.6 g | 1 | 40–80 | 261.5 | 38.6 | 300/20.7 |
SW-5201-220-IR | 340 g | 340 mg–6.8 g | 1 | 50–100 | 223.5 | 61.4 | 300/20.7 |
SW-5201-330-IR | 475 g | 475 mg–9.5 g | 1 | 50–100 | 280.2 | 61.4 | 250/17.2 |
※ 兼容市场上所有快速液相制备色谱系统。
SepaFlash® Phenyl 色谱柱在苯二氮卓类药物化合物的分离纯化
应用于糖类化合物的分离纯化
应用于含硼有机光电材料领域分离纯化
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