ELISA试剂盒操作步骤
1. 加样:标准品设定5个浓度点10个孔,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓度的标准品,空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔,在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6. 温育:操作同2。
7. 洗涤:操作同4。
8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转)。
10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
上海酶联生物2024国庆节放假通知
酶联生物揭秘保存血清样本避免影响ELISA试剂盒结果
酶联生物Battenin蛋白(BTS)Elisa试剂盒使用方法
酶联生物组蛋白H4(H4)分析检测试剂盒实验器材的使用方法
相关产品
结核菌杆抗体IgM(TB-AbIgM)Elisa Kit用途范围
NIFK 抗原(重组蛋白)
NIF3L1 抗原(重组蛋白)
科研使用癌/睾丸抗原62(CTAG62)原装Elisa试剂盒
NID2抗原(重组蛋白)
雌二醇(E2)Elisa分析检测试剂盒96T/48T
补体成分2(C2)国产Elisa试剂盒液体盒装
酶联文献胎盘蛋白(PP)Elisa检测试剂盒
酪酪肽3-36(PYY3-36)科研Elisa检测试剂盒用途范围
NHP2抗原(重组蛋白)
自主研发生产蛋白激酶R(PKR)国产Elisa试剂盒
NGF抗原(重组蛋白)
甲基化CpG结合蛋白2(MECP2)Elisa Kit免费待测服务
NGEF 抗原(重组蛋白)
干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)Elisa Kit
关注
拨打电话
留言咨询