酶联生物流式细胞术的应用原理讲解，助力科研，事半功倍！

上海酶联生物科技有限公司

2023/12/06 09:12

流式细胞术在过去30年里得到迅速发展，在免疫学、分子生物学、细菌学、病毒学、癌症生物学和传染病学等领域得到广泛应用。比如，流式细胞术对研究免疫系统状态及其对传染病和癌症的反应非常重要，它可以表征来自血液和骨髓的混合细胞群，以及由淋巴结、脾、粘膜组织、实体肿瘤等固体组织分解成的单个细胞。除了分析细胞外，流式细胞术另一个主要应用是对细胞进行分选，以满足使用者进一步的分析需求。

本文将主要以细胞生物学、免疫学和分子生物学为例，介绍流式细胞术在实际中的应用。

流式细胞

细胞生物学与免疫学免疫分型

免疫分型在流式细胞术的应用中最常见，它利用流式细胞术的独特能力同时分析混合细胞群的多个参数。免疫分型最基本的形式就是使荧光偶联抗体与细胞表面对应的抗原特异性结合，之后利用流式细胞仪，根据细胞表面的荧光对细胞做出分析。大多数抗原都有特定的分化亚群编号或者CD编号，对应的抗体用相同的方式命名。

大多数免疫细胞都有特定的CD标记，这些细胞标记称为谱系标记，用于定义特定细胞群，以便在每个免疫分型实验中进行额外分析。例如T细胞标记物(CD3, CD4, CD8)， B细胞标记物(CD19, CD20)，单核细胞标记物(CD14,
CD11b)和NK细胞标记物(CD56, CD161)。

除了定义细胞群的谱系标记外，还使用其他标记来描述每个细胞群的特征。这些标记包括激活标记(CD69、CD25、CD62L)、记忆标记(CD45RO、CD27)、组织归巢标记(α4/β7)和趋化因子受体标记(CCR7、CCR5、CXCR4、CCR6)等。通常，免疫分型还针对细胞内标记物，如FoxP3(定义Treg细胞)、细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2定义Th1细胞)、增殖标记物(Ki67、CFSE)和抗原特异性标记物等。

抗原特异性反应

在抗原特异性反应中，使用特定抗原刺激细胞，之后通过MHC多聚体来寻找细胞因子产生、细胞增殖、细胞激活、细胞记忆或抗原识别等。MHC多聚体是生物素化的MHC单体(MHC-I或MHC-II)以四聚体、五聚体或右旋聚体的形式结合在荧光链霉亲和素骨架上。这些MHC多聚体被“装上”特定的抗原，之后与识别该抗原的T细胞结合，用来表明T流式细胞术对特定抗原的反应水平。抗原特异性反应通常用于疫苗研究。

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