上海远慕详述：ELISA试剂盒操作注意事项

上海远慕生物科技有限公司

ELISA试剂盒实验时操作注意事项

关于ELISA试剂盒的每一步都要注意才行。ELISA试剂盒加样时的防错小经验

（1）用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常容易区分。

（2）可以利用液面反光与没有加的孔加以区别

（3）在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面产生小气泡，也可以加以区分
3、棋盘试验的操作方法：

（1）将抗原按一定的梯度倍比稀释后，按照ELISA从上到下（或者从左到右）的顺序包被。

（2）将抗体按一定的梯度倍比稀释后按照ELISA试剂盒从左到右或者从上到下加入。

（3）二抗的稀释倍数是一定的，然后显色，读值。OD值的测定时，波长要根据显色剂的不同而定，一般上大家都使用TMB显色，450nm读值。根据读值得结果可以选定合适的抗原和抗体效价，这就是棋盘实验的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作浓度不确定的话就用一抗和二抗作棋盘试验。

注意事项

1．ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，ELISA试剂盒以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

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