细胞计数及活力测定实验

2019/04/30   下载量： 10 次

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应用领域 医疗/卫生
检测样本 其他
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参考标准 细胞计数及活力测定实验

一、原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。

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一、原理

 

培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。

 

在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。

 

用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。

 

二、仪器、用品与试剂

 

1、仪器与用品：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪（或分光光度计）

 

2、试剂：0.4%台盼兰，0.5%四甲基偶氮唑盐（MTT）、酸化异丙醇

 

3、材料：细胞悬液

 

三、操作步骤

 

（一）细胞计数

 

1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

 

2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。

 

3、静置3分钟。

 

4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：

 

细胞数/ml=4大格细胞总数/ 4×10000

 

注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

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上海远慕生物科技有限公司
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