方案摘要
方案下载| 应用领域 | 生物产业 |
| 检测样本 | 其他 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | TRIzol RNA提取方法, |
TRIzol RNA提取方法： （1）操作简单的，提取方便，回收率高； （2）提取的RNA的质量高，对cDNA库，RT-PCR和Northern?Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。
TRIzol RNA提取方法：
（1）操作简单的，提取方便，回收率高；
（2）提取的RNA的质量高，对cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。
实验原理:
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。
细胞裂解后，细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质，再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。
实验材料: 细胞样品
试剂\试剂盒: TRIzol试剂 氯仿 异丙醇 75%乙醇 DEPC H2O
仪器\耗材: 离心管 离心机 EP管 匀浆器 移液管 冰袋 漩涡振荡器
实验步骤:
1. 样品处理：
（1） 培养细胞： 收获细胞1-5×107，移入1.5ml离心管中，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。
（2） 组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。
2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。
3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。
4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）
注意事项:
1.样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。
（2） 组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。
2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。
3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。
4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）
注意事项:
1.样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。
文献贡献者
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