流式细胞术间接免疫荧光标记的样品制备实验检测仪器_检测方案

方案摘要

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实验方法原理: 取一定量的细胞悬液，先加入特异的第1抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，在加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体复合物，以流式细胞仪检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。

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配置单

方案详情

实验目的:

主要用于科研样品的检测。

实验方法原理:

取一定量的细胞悬液，先加入特异的第1抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，在加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体复合物，以流式细胞仪检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。

实验材料: 实验样品

试剂试剂盒:抗体、PBS溶液

仪器耗材: 移液器移液吸头离心机

实验步骤:

一、不同来源样品的处理

1 . 培养细胞

（1）培养细胞用0.25%的胰酶消化。

（2）PBS或生理盐水洗涤细胞2次，再用PBS或生理盐水悬浮细胞，加入预冷的无水乙醇，终浓度为60%——70% ，快速混匀，并用封口膜封口，置4℃下可保存15天左右。

2. 新鲜标本

（1）将标本切成1——2mm3的小块。

（2）PBS或生理盐水清洗后去除上清，加入0.2％胶原酶（或0.15％胰蛋白酶）37℃消化10——30min（根据实验及不同组织确定），并不断振动。

（3）300目尼龙筛过滤，除去组织团块，PBS洗涤2次，300g离心5min，获得已消化的细胞。

3. 石蜡包埋标本

（1）标本在切片机上切取3——5片50μm厚的组织片。

（2）将切片彻底脱蜡，梯度乙醇（100％、95％、70％）及蒸馏水水化。

（3）0.5％胃蛋白酶（或胰蛋白酶）37℃消化30min，每隔10min振动1次。

（4）300目尼龙筛过滤，获得的细胞悬液PBS洗涤2次，300xg离心5min。

注意：脱蜡一定要完全（若加入100％乙醇无絮状物飘起即可）；切片厚薄适宜，太薄碎片多，影响FCM分析结果，太厚易造成脱蜡不净；注意掌握消化时间，避免已释放的细胞被消化。

文献贡献者

上海远慕生物科技有限公司

银牌会员丨第11年

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