方案摘要
方案下载| 应用领域 | 医疗/卫生 |
| 检测样本 | 其他 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | 单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR)，都要广泛得多。 |
SNP是我们考察遗传变异的最小单位,据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为，相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型（haplotype）。
一、原理
SNP (Single Nucleotide Polymorphism)即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR)，都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的最小单位,据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为，相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型（haplotype）。大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型（每个具有至少5%的频率），它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多SNP位点，但是我们一旦掌握了这个区域的单体型，就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型，获取大部分的遗传多态模式。
二、样品准备
1. DNA抽提
① 1、取新鲜肌肉组织约100mg，PBS漂洗干净，置于1.5ml离心管中，加入液氮，迅速磨碎。
② 加200μl 缓冲液GA，震荡至彻底悬浮。加入20μl 蛋白酶K（20mg/ml）溶液，混匀
③ 加220μl 缓冲液GB，充分混匀，37℃消化过夜，溶液变清亮。加220μl 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
④ 将上述一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB 中，（吸附柱放入废液收集管中）12000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
⑤ 加入500μl 去蛋白液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
⑥ 加入700μl 漂洗液GW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心30 秒，弃掉废液。加入500μl 漂洗液GW, 12000rpm 离心30 秒，弃掉废液。将吸附柱CB 放回废液收集管中，12000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液。
⑦ 将吸附柱CB 转入一个干净的离心管中，加入100μl 洗脱缓冲液（洗脱缓冲液应在60-70℃水浴预热），混匀，室温放置15 分钟，12000rpm 离心30 秒。洗脱第二次，将洗脱缓冲液50μl 加入吸附柱中，室温放置15 分钟，12000rpm 离心30 秒。
⑧ 采用Beckman DU® 640 spectrophotometer 检测提取到的基因组DNA 浓度，在OD260 处有显著吸收峰。同时检测纯度，OD260/280 的值应为为1.7-1.9。
⑨ 从原液中取出相应体积DNA 溶液，稀释致50ng/ul，原液置于-70℃保存，稀释液置于-20℃保存。
2. PCR扩增目的片段
按相关的试剂说明在标准反应管中准备反应体系，典型的PCR反应体系如下（20ul体系）：
10×Buffer 2ul
Taq酶 1ul
dNTP 0.5ul
上游引物 0.5ul
下游引物 0.5ul
无菌水 14.5ul
DNA模板 1ul
文献贡献者
bradford法测蛋白浓度误差原因分析
细胞不贴壁原因+促进细胞贴壁的方法
抗体亲和力从高变低的原因+提高方法
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