方案摘要
方案下载应用领域 | 医疗/卫生 |
检测样本 | 其他 |
检测项目 | |
参考标准 | 单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR),都要广泛得多。 |
SNP是我们考察遗传变异的最小单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为,相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型(haplotype)。
一、原理
SNP (Single Nucleotide Polymorphism)即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR),都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的最小单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为,相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型(haplotype)。大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多SNP位点,但是我们一旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。
二、样品准备
1. DNA抽提
① 1、取新鲜肌肉组织约100mg,PBS漂洗干净,置于1.5ml离心管中,加入液氮,迅速磨碎。
② 加200μl 缓冲液GA,震荡至彻底悬浮。加入20μl 蛋白酶K(20mg/ml)溶液,混匀
③ 加220μl 缓冲液GB,充分混匀,37℃消化过夜,溶液变清亮。加220μl 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
④ 将上述一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB 中,(吸附柱放入废液收集管中)12000rpm 离心30 秒,弃掉废液。
⑤ 加入500μl 去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心30 秒,弃掉废液。
⑥ 加入700μl 漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30 秒,弃掉废液。加入500μl 漂洗液GW, 12000rpm 离心30 秒,弃掉废液。将吸附柱CB 放回废液收集管中,12000rpm 离心2 分钟,尽量除去漂洗液。
⑦ 将吸附柱CB 转入一个干净的离心管中,加入100μl 洗脱缓冲液(洗脱缓冲液应在60-70℃水浴预热),混匀,室温放置15 分钟,12000rpm 离心30 秒。洗脱第二次,将洗脱缓冲液50μl 加入吸附柱中,室温放置15 分钟,12000rpm 离心30 秒。
⑧ 采用Beckman DU® 640 spectrophotometer 检测提取到的基因组DNA 浓度,在OD260 处有显著吸收峰。同时检测纯度,OD260/280 的值应为为1.7-1.9。
⑨ 从原液中取出相应体积DNA 溶液,稀释致50ng/ul,原液置于-70℃保存,稀释液置于-20℃保存。
2. PCR扩增目的片段
按相关的试剂说明在标准反应管中准备反应体系,典型的PCR反应体系如下(20ul体系):
10×Buffer 2ul
Taq酶 1ul
dNTP 0.5ul
上游引物 0.5ul
下游引物 0.5ul
无菌水 14.5ul
DNA模板 1ul
bradford法测蛋白浓度误差原因分析
细胞不贴壁原因+促进细胞贴壁的方法
抗体亲和力从高变低的原因+提高方法
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询