聚合酶链式反应（PCR）详细实验步骤

2023/06/30   下载量： 0 次

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应用领域 生物产业
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试剂配制和准备： （1） 双蒸水： 100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。 （2） PCR中所需要的各种试剂

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一、准备工作
1、实验器具与材料：
（1）移液枪：200ul、10ul
（2）吸头：200ul、20ul
（3）吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个
（4）EP管1.5ml、100ul

2、实验器具的处理与准备
塑料制品：（包括吸头、EP管等）
送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。

3、试剂配制和准备：
（1） 双蒸水： 100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。
（2） PCR中所需要的各种试剂

二、PCR时注意事项：
佩戴一次性手套，同时避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。

三、PCR步骤
1、准备100ul EP管
2、依次在管中加入：（50ul反应体系）
ddH2O37.5ul×
10mM dNTP1ul×
10×PCR buffer5ul×
25mM MgCl2
（加之前要摇匀）3ul×
上游引物1ul×
下游引物1ul×
模板cDNA1ul

3、稍离心
4、100℃沸水浴1分钟
5、趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作）
6、再加入50ul液体石蜡封闭
7、10000rmp离心1分钟
8、PCR条件
94℃ 1min
58℃ 50sec
72℃ 1min30sec
进行40个循环，然后72℃ 10min 完后4℃保温。
9、10000rmp离心5min
10、将下层水相转入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。

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上海远慕生物科技有限公司
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