方案摘要
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科学研究中需要用到各种细胞系作为实验模型,这些细胞系通常可以从各大细胞库获取。而在收到细胞库寄送来的常温细胞时,常常会遇到一些问题,比如细胞脱落、皱缩、有黑点,接下来远慕为大家详细解答这些情况。
科学研究中需要用到各种细胞系作为实验模型,这些细胞系通常可以从各大细胞库获取。而在收到细胞库寄送来的常温细胞时,常常会遇到一些问题,比如细胞脱落、皱缩、有黑点,接下来远慕为大家详细解答这些情况。
一、收货时,细胞脱落
有些细胞本身贴壁不牢,很容易脱落(如293系列,TM3,TM4,Raw264.7,原代内皮细胞,原代平滑肌细胞)。
另外,运输过程中受到碰撞或气温过低,也可能导致细胞脱落。
处理办法
① 脱落的细胞进行离心收集,并在离心管中消化。
② 仍然贴壁的细胞,按照常规方法加入胰酶或其他解离剂消化。
③ 再将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合,按比例接种到新的培养器皿中。
二、收货时,细胞皱缩
运输过程中,路途颠簸加上温度不稳定,常温细胞会发生回缩。
处理办法
放入培养箱静置2-4小时,若4小时后仍然没有伸展,延长静置时间。注意,过夜静置时,需倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松透气,保持气体交换(L15培养体系除外)。
若有脱落细胞,需离心收集。
三、收货时,细胞黑点较多
当受到运输环境影响时,细胞会发生应激反应,分泌活动增加,导致分泌蛋白增多,呈黑色圆球状,分布无规律。
同时,路途中凋亡的细胞碎裂后将产生细胞碎片,为黑色或透明色,呈不规则状,分布无规律。
另外,有些细胞本身分泌活动较强,培养时常伴随黑点。
处理办法
1.贴壁细胞放培养箱静置2-4小时后,正常换液或传代;
2.悬浮细胞800~1000rpm(约160~200g) 低速离心3min去除碎片。通常培养数天后,细胞状态会逐渐稳定下来。
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