生物素标记抗体效率不高的原因+解决方法

2024/10/12   下载量: 0

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生物素,是一个小分子,经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合,不仅可以很好地保持大分子的生物活性,而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用。可用于免疫沉淀、免疫检测(ELISA) 及各类核酸、蛋白质杂交反应,可大幅度缩短吸附生物素标记分子所需的时间并简化操作设备。

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生物素,是一个小分子,经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合,不仅可以很好地保持大分子的生物活性,而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用。可用于免疫沉淀、免疫检测(ELISA) 及各类核酸、蛋白质杂交反应,可大幅度缩短吸附生物素标记分子所需的时间并简化操作设备。


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生物素总类

标记蛋白质氨基的活化生物素: N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS) 。

标记蛋白质醛基的活化生物素:酰肼(BHZ) 和肼化生物胞素(BCHZ) 。

标记蛋白质巯基的活化生物素:3(- N-马来酰亚胺-丙酰) -生物胞素(MPB) 。

标记蛋白质核酸的活化生物素:常用于标记核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、 BNHS 和 BHZ。

生物素标记抗体效率不高的主要原因包括以下几个方面‌:

‌1.抗体氨基基团难以接近‌:抗体的氨基基团可能被包裹在蛋白质内部,难以与生物素发生反应,导致标记效率不高‌1。

‌2.标记反应条件不当‌:如果活化生物素与待标记抗原或抗体的比例不当,或者反应条件不合适,都会影响标记效率‌1。

‌3.存在干扰物质‌:如果反应混合液中含有叠氮钠或游离氨基等物质,会抑制标记反应,需要在反应前对溶液进行充分透析‌1。

‌为了提高生物素标记抗体的效率,可以采取以下措施‌:

‌1.选择合适的标记条件‌:根据抗体的特性选择适当的标记反应条件和活化生物素与抗体的比例,确保标记反应高效进行‌1。

‌2.使用去污剂‌:如果抗体的氨基基团难以接近,可以使用去污剂如Triton X-100或Tween-20,帮助暴露氨基基团,提高标记效率‌1。

‌3.充分透析‌:在反应前对溶液进行充分透析,去除可能抑制标记反应的物质,确保标记反应顺利进行‌1。

通过以上措施,可以有效提高生物素标记抗体的效率,确保实验结果的准确性和可靠性。

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