1、溶液配制
2.1.流动相配制:
流动相A:取0.1mol/L醋酸钠溶液(用醋酸调pH至6.5)930ml与乙腈70ml,混匀,超声即可;
流动相B:取水100ml与乙腈400ml,混匀,超声即可;
2.2.样品配制:
对照溶液:分别取L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸以及L-脯氨酸对照各适量,用0.1mol/L盐酸溶液配制成1ml分别含L-羟脯氨酸80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg以及L-脯氨酸0.12mg的混合溶液;
样品溶液:取本品0.25g,置25ml量瓶中,用0.1mol/L盐酸溶液20ml超声处理30分钟,放冷,用0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度,摇匀,取2ml置5ml安瓿中,加盐酸2ml,150℃水解1小时,放冷,移至蒸发皿中,用水10ml分次洗涤,洗液并入蒸发皿中,蒸干,残渣用0.1mol/L盐酸溶液溶解,移至25ml量瓶中,定容至刻度,摇匀;
分别取上述对照溶液和样品溶液各5ml,分别置25ml量瓶中,各加0.1mol/L异硫氰酸酯的乙腈溶液2.5ml,1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml,摇匀,室温放置1小时后,加50%乙腈至刻度,摇匀。取10ml,加正己烷10ml,振摇,放置10分钟,取下层溶液,滤过,取续滤液即可(客户提供)
2、液相色谱仪器条件
Column: ChromCore 120 C18, 5 μm
Dimension: 4.6 × 250 mm
Mobile phase:
A)乙腈-0.1mol/L醋酸钠溶液(醋酸调pH至6.5)=7:93
B)乙腈-水=4:1
Gradient:
时间 | A | B |
0 | 100 | 0 |
11 | 93 | 7 |
13.9 | 88 | 12 |
14 | 85 | 15 |
29 | 66 | 34 |
30 | 0 | 100 |
40 | 0 | 100 |
Flow rate: 1 mL/min
Temperature: 43 ℃
Injection: 3 μL
Detection: UV 254 nm
3、实验谱图和数据
3.1 对照溶液
3.2 样品溶液
4、结论
使用纳谱分析ChromCore 120 C18 5μm,4.6×250mm色谱柱,在中国药典2015年版一部标准条件下进行测试,各组分具有良好的峰形和分离度,理论板数满足中国药典2015年版一部标准要求,适用于阿胶的含量测定。
注意事项
因溶剂效应出现的峰型异常,可以适当的减少进样体积。
因对照和样品溶液,均经过衍生处理,建议在30分钟后,用100%的流动相B至少运行10分钟,将衍生试剂冲洗出来后,再回到初始条件平衡色谱柱。
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