供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100 mL |
货号: | ZY61224-100 |
CAS号: |
BCIP/NBT显色试剂盒
BCIP/NBT Chromogenic Kit
BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-inodlylphosphate)。NBT即四唑淡蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium),为深蓝色无定形微溶物质。当二者存在时,在碱性磷酸酶作用下,NTB被还原形成不溶性的蓝色(在硝酸纤维素膜上)或紫色(在尼龙膜上)沉淀,据此颜色反应来鉴定碱性磷酸酶。该反应的示意图如下:
产品特点:
1.即开即用,省去自配溶液的麻烦。
2.条件经过优化,最低可以检测到0.5fmol的靶分子(在硝酸纤维素膜上),并且背景低,不需要自己摸索。
3.与硝酸纤维素膜和尼龙膜兼容,也可用于琼脂糖凝胶原位杂交。
4.适用于中等灵敏度检测各种印迹膜检测,包括Southern杂交、Northern杂交、Western blot沉淀、免疫组化等。如果要高灵敏度检测,最好使用ECL 检测。
5.肉眼观察实验结果,直观简单,不需要额外的试剂和仪器。
试剂盒组成:
注意:本产品可以配制100mL BCIP/NBT 显色液,具体使用次数与膜的大小密切相关。
储存条件:常温运输,4℃避光保存,有效期一年。
自备试剂:超纯水、结合有AP 标记的探针或抗体的印迹膜。
使用方法:
一、配制溶液
1.按每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液的比例计算所需显色液的用量,并按下表的配方配制的所需量的BCIP/NBT 显色液待用。说明:下表以10mL 为例,用户需要根据计算得到的所需显色液体积按比例增减各成分用量。
注意:此溶液必须在1小时内使用。
2.用10×AP缓冲液配制跟NBT-BCIP显色液等体积的1×AP缓冲液待用。
二、显色
3.同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的1×AP缓冲液中,脱色摇床上摇晃5分钟。本方法也可以用于琼脂糖凝胶原位杂交,处理方法一样,只是把经过AP 标记探针或抗体杂交的印迹膜改成经过AP 标记探针或抗体杂交的凝胶。
4.同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的BCIP/NBT 显色液中(每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液),室温避光静置显色直到看见所需条带。在硝酸纤维素膜上,条带将呈现蓝色;在尼龙膜上,条带将呈现紫棕色。注意:显色过程中不要摇晃,否则有色沉淀物不容易聚集。高丰度的靶分子可能只需5-30分钟显色,低丰度的靶分子可能需要24小时显色。显色反应一般会在24小时结束,所以显色时间没有必要超过24小时。37℃放置可加速显色反应,缩短显色时间。
5.显色结束后,将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃以终止显色反应。数分钟后需要换水,共三次。
6.用吸水纸吸干膜上的水分,照相或扫描处理后避光干燥保存印迹膜。对硝酸纤维素膜,如果用二甲苯将膜浸湿,则条带会增强约5倍(膜变得透明,使背景变低,条带更明显所致)。
7.如果不避光保存条,印迹膜上的条带会逐渐褪色。硝酸纤维素膜上的颜色不能脱去,如果想脱去尼龙膜上条带的颜色,可以将膜浸入到装在玻璃容器的DMF溶液中,再进行热水浴直到颜色脱去(需要在通风柜中进行)。硝酸纤维素膜上的条带不能脱去。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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