电泳级SYBR Green I

电泳级SYBR Green I

SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade

SYBR Green I，EG是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA荧光染料，适用于各种核酸电泳分析。

产品特点：
1.低毒安全，其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。
2. 髙灵敏，SYBR Green I与dsDNA 结合，荧光信号会增强800-1000倍，至少可检出 20 pg DNA，灵敏度高于EB染色法10－25倍。
3.适用范围广，可适用于多种电泳分析，包括琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与我司的SuperBuffer-2 兼容。
4. 不影响其它修饰酶(Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)作用。
5. 操作简单，无须脱色或冲洗。

储存条件：常低温运输，-20℃闭光保存，有效期一年。

使用方法之一：电泳前染色
?本方法是在上样时对DNA进行染色，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2. 按常规方法制备胶，胶的厚度最好不要超过5mm，胶中不能含任何染料。
3. 将100 X电泳前染色液与DNA样品(包括DNA Marker)按1：10的比例混合，室温放置10-15分钟，加上样液后上样。
4.上样后电泳。
5.在300nm的UV下观察。UV的功率最好为90W(15W X 6)，手持UV一般功率不够，难以得到满意的灵敏度。除300nm外，SYBR Green I还可以在500nm和380nm的激发光下观察(如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪)。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。
?注意：不要使用与EB 兼容的红色滤光片(能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。
7.后续Southern或Northern转膜或胶回收按常规操作进行。

使用方法之二：电泳中染色
?本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中，优点是不需要额外的染色处理，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中，使其终浓度在0.5-1X左右，混合均匀后倒胶，厚度最好不要超过5 mm。
2. 按常规方法上样和电泳。
3.电泳后观察和照相处理同方法一。
?注意：由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I在加热融化时会大量分解，所以琼脂糖凝胶最好需要多少配多少。

使用方法之三：电泳后染色
?本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE，检测灵敏度可达20 pg DNA，但该方法需要单独的染色处理。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用pH7.0-8.3的缓冲液(如：TAE，TBE或TE)将10000×SYBR Green I 稀释10000倍成1×电泳后染色液。
3. 将电泳后染色液倒入合适的聚丙烯容器中，放入琼脂糖凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟。对聚丙烯酰胺凝胶，可取下一块玻璃板，然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE胶板上，让染色液均匀地覆盖整个PAGE胶板，静置染色30分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4. 观察和照相处理同方法一。
?注意：电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小(胶越大，非特异吸附产生的损耗就越大)，一般可重复使用4次。

注意事项：
1. 融化：本产品溶于DMSO中，融化时一定要让其彻底融化，否则SYBRGreen I在液相和固相中浓度不均，影响实验的可重复性。
2. 容器：SYBR Green I 对聚丙烯材料的亲和力非特意吸附最小，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙烯类容器，容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙烯容器。
3. 反复使用：由于凝胶和容器的非特意吸附，使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。
4. 稳定性：稀释后的SYBR Green I工作液体最适保存条件是闭光、密封、低温(4℃)、pH在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中，禁止用微波加热处理SYBR Green I。
5. 稀释液：可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I，包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2等。最好不要使用水和pH7.8(25℃)的Tris缓冲液。后者的pH在4℃时会升高到8.4。
6.其他影响因素：染色液中最好不要有SDS，也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙烯容器时，0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I与DNA 结合。用deaza-G 替代G的DNA 不能有效染色。

疑难解答：
Q：DNA 条带为何出现弯曲或模糊？
A：DNA 过量，将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2小时，否则SYBR Green I 会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。电压不能太高，否则产热会影响SYBR Green I与DNA的结合。
Q：醇/盐沉淀法能否把结合在DNA上的SYBR Green I 去掉？
A：可以。其中乙醇效果最好，异丙醇次之。但正丁醇、氯仿和苯酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。
Q：用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern或Northern Blot？
A：可以，但最好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I与DNA 分开。
Q：能否用SYBR Green I染色膜上的DNA。
A：可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA，不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！