厌氧菌的分离培养与初步鉴别!
厌氧菌(anaerobicbacteria)是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌,而不能在空气(18%氧气)和(或)10%二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。这类细菌缺乏完整的代谢酶体系,其能量代谢以无氧发酵的方式进行。厌氧菌是人体正常菌群的组成部分,广泛存在于人体皮肤和腔道的深部黏膜表面,在组织缺血、坏死,或者需氧菌感染的情况下,导致局部组织的氧浓度降低,才发生厌氧菌感染。
一、厌氧菌标本的送检方法与处理
标本送到实验室后,应在20~30min内处理完毕,最迟不超过2h,以防止标本中兼性厌氧菌过度繁殖而抑制厌氧菌的生长。如不能及时接种,可将标本置室温保存(一般认为,冷藏对某些厌氧菌有害,而且在低温时氧的溶解度较高)。
1)针筒运送:一般用无菌针筒抽取标本后,排尽空气,针头插入无菌橡皮塞,以隔绝空气,立即送检。这种方法多用于液体标本的运送,如血液、脓液、胸腹水、关节液等医.学教育网搜集整理。
2)无菌小瓶运送:一般采用无菌的青霉素小瓶,瓶内加一定量的培养基和少量氧化还原指示剂,用橡皮盖加铝盖固定密封,排除瓶内空气,充以C02气体。同时先观察瓶内氧化还原指示剂的颜色,以判断瓶内是否为无氧环境,如合格将用无菌注射器将液体标本注入瓶中即可。
3)棉拭子运送:一般不采用棉拭子运送,如果使用该方法,一定使用特制运送培养基,确保无氧环境,确保不被污染,确保快速送检。
4)厌氧罐或厌氧袋运送:将厌氧罐或厌氧袋内装入可有效消耗氧气的物质,确保无氧环境。该方法一般用于运送较大的组织块或床边接种的培养皿等。
二、厌氧菌的分离培养
厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段,其中初代培养相对比较困难,关键的问题就是厌氧环境和培养基的选择。初代培养的一般原则是:
1)先将标本涂片染色直接镜检,指导培养基的选择。
2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。
3)zuihao多选1~2种覆盖面不同的选择性培养基。
4)尽量保证培养基新鲜。
5)要考虑到微需氧菌存在的可能。
1.选用适当的培养基接种:应接种固体和液体两种培养基;
(1)培养基的使用,应注意下列各点:
1)尽量使用新鲜培养基,2~4h内用完;
2)应使用预还原培养基,预还原24~48h更好;
3)可采用预还原灭菌法制作的培养基(用前于培养基中加入还原剂,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等,尽可能使预还原剂处于还原状态);
4)液体培养基应煮沸10min,以驱除溶解氧,并迅速冷却,立即接种;
5)培养厌氧菌的培养基均应营养丰富,并加有还原剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。
(2)培养基的选择:初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。
1)非选择培养基:本培养基使分离的厌氧菌不被抑制,几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。
2)选择培养基:为有目的选择常见厌氧菌株,以便尽快确定厌氧的种类。
2.每份标本至少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10à2环境中培养,以便正确地培养出病原菌,从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。
3.厌氧培养法
(1)厌氧罐培养法。
(2)气袋法。
(3)气体喷射法:又称转管法。
(4)厌氧手套箱培养法:是迄今厌氧菌培养的zuijia仪器之一。
(5)其他培养法:平板焦性没食子酸法;生物耗氧法;高层琼脂培养法。
4.厌氧状态的指示:美蓝和刃天青。无氧时均呈白色,有氧时美蓝呈蓝色,刃天青呈粉红色。
5.分离培养厌氧菌失败的原因:
①培养前未直接涂片和染色镜检;
②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长;
③未用新鲜配制的培养基;
④未用选择培养基;
⑤培养基未加必要的补充物质;
⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为weiyi厌氧菌培养基;
⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气;
⑧催化剂失活;
⑨培养时间不足;
⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。
三、厌氧菌直接镜检初步鉴别
coccus,球菌;b:bacillus,杆菌。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!
新型基因回路有望改变癌细胞耐药性,赶紧收藏起来吧!
最新研究发现儿童孤独症谱系障碍与肠道微生物变化有关!
细胞免疫荧光检测服务的知识与应用及技术操作流程!
具有药用价值的植物病原真菌的种类及化学成分和药理作用!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
单孢共头霉原变种
Thamnostylum Repens
Zychaea Mexicana
Piptocephalis Cylindrospora
Piptocephalis Indica
Piptocephalis Repens
Companilactobacillus nodensis
Companilactobacillus nantensis
Companilactobacillus mishanensis
Companilactobacillus mindensis
Companilactobacillus metriopterae
Companilactobacillus kimchiensis
Companilactobacillus kedongensis
关注
拨打电话
留言咨询