细菌对于蛋白质和氨基酸的代谢试验!
细菌对于蛋白质和氨基酸的代谢原理为:不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌对蛋白质的分解,一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽(或氨基酸),渗入菌体内,然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。具体试验方法有:①明胶液化试验;②吲哚试验(靛基质试验);③硫化氢试验;④尿素酶试验;⑤苯丙氨酸脱氨酶试验;⑥氨基酸脱羧酶试验。
1.明胶液化试验
(1)原理:某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶,能使明胶分解为氨基酸,从而失去凝固力,半固体的明胶培养基成为流动的液体。
(2)方法:将被检菌穿刺接种于明胶培养基,于22℃培养7d,逐日观察结果。若用35℃孵育,因明胶在此温度下自行液化,故在观察结果前,先置4℃冰箱内30min,再看结果。
(3)结果:培养基呈液化状态为阳性。
(4)应用:肠杆菌科细菌的鉴别,如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶,而其他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外多数假单胞菌也能液化明胶医学教|育网搜集整理。
2.吲哚(靛基质)试验
(1)原理:某些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚(靛基质),当加入吲哚试剂(对位二甲氨基苯甲醛)后则形成红色的玫瑰吲哚。
(2)培养基:蛋白胨水培养基。
(3)方法:将待检菌接种于上述培养基中,于35℃培养24~48h,沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。
(4)结果:于两者液面接触处出现红色为阳性,无色为阴性。
(5)应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
3.硫化氢试验
(1)原理:某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸(如胱氨酸、半胱氨酸)产生硫化氢,硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀。此试验可间接检测细菌是否产生硫化氢。
(2)培养基:醋酸铅培养基。
(3)方法:将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基,于35℃培养24~48h观察结果。
(4)结果:培养基变黑为阳性,不变为阴性。
(5)应用:主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌,绝大多数硫化氢阳性,其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。
4.尿素分解试验
(1)原理:某些细菌具有尿素分解酶,能分解尿素产生大量的氨,使培养基呈碱性。
(2)培养基:尿素培养基。
(3)方法:将待检菌接种于尿素培养基,于35℃培养18~24h观察结果。
(4)结果:培养基呈碱性,使酚红指示剂变红为阳性,不变为阴性。
(5)应用:主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性,而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。
5.苯丙氨酸脱氨酶试验
(1)原理:某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶,使苯丙氨酸脱去氨基,形成苯丙酮酸,加入氯化铁试剂后产生绿色反应。
(2)培养基:苯丙氨酸琼脂培养基。
(3)方法:将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上,于35℃培养18~24h,滴加10%三氯化铁试剂3~4滴,自斜面上方流下。
(4)结果:出现绿色为阳性。应立即观察结果,延长反应时问会引起褪色。
(5)应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性,肠杆菌种中其他细菌均为阴性。
6.氨基酸脱羧酶试验
(1)原理:具有氨基酸脱羧酶的细菌,能分解氨基酸使其脱羧生成胺(赖氨酸→尸胺,鸟氨酸→腐胺,精氨酸→精胺)和二氧化碳,使培养基变碱。使指示剂显示出来。
(2)培养基:氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。
(3)方法:将被检菌分别接种于赖氨酸(或鸟氨酸或精氨酸)培养基和氨基酸对照培养基中,并加入无菌液体石蜡或矿物油,于35℃培养l~4d,每日观察结果医学教|育网搜集整理。
(4)结果:对照管应呈黄色,测定管呈紫色(指示剂为溴甲酚紫)为阳性,若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义,不能作出判断。
(5)应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外,其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外,其他志贺菌均为阴性。
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