空肠弯曲菌的培养特性与检测方法!
空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni )菌体轻度弯曲似逗点状,长1.5~5 μm,宽0.2~0.8 μm。菌体一端或两端有单鞭毛,运动活泼,在暗视野镜下观察似飞蝇。无荚膜,不形成芽胞。微需氧菌,在含2.5%-5% O2或10% CO2的环境中生长最好。最适生长温度37℃-42℃。该菌抵抗力不强,易被干燥、直射日光及弱消毒剂所杀灭,对低温敏感,室温下(20℃-23℃)很快死亡,在30℃以下不繁殖。空肠弯曲菌是多种动物如牛、羊、狗及禽类的正常寄居菌。
一、菌种简介
拉丁属名:Campylobacter jejuni
中文名称:空肠弯曲菌
属名:Campylobacter
种名加词:jejuni
模式菌株:非模式菌株
主要用途:研究;分析检测
具体用途:研究、质量控制
特征特性:G-轻度弯曲杆菌,氧化酶、接触酶阳性,尿素酶阴性,42℃生长,25℃不生长,马尿酸盐水解试验阳性,不发酵糖类。微需氧,最适温度为37~42℃。
生物危害程度:三类
致病对象:人畜共患
致病名称:急性肠炎等
传播途径:经口、消化道
培养基:胰蛋白胨 10.0g,蛋白胨 10.0g,葡萄糖 1.0g ,酵母浸膏 2.0g 氯化钠 5.0g,亚硫酸氢钠(NaHSO3) 0.1g,蒸馏水 1000mL。将各成分溶于蒸馏水中。121℃高压灭菌15min。最终pH7.0.。FBP浓原液:硫酸亚铁(FeSO4) 2.5g ,焦亚硫酸钠(Na2S2O5) 2.5g,丙酮酸钠(sodium pyruvate) 2.5g;将各成分溶于100mL蒸馏水中,经0.20um滤膜过滤除菌,存于4℃。每100mL经灭菌的基础液中加1mL,混匀。(注:如实验需要可加入1号抗生素液和2号抗生素液)。1号抗生素溶液:万古霉素 0.75 g,三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐(trimethoprimlactate) 0.38g ,多粘菌素B 250 000 IU 将各成分溶于500mL蒸馏水中,经0.20μm滤膜过滤除菌。每100mL经灭菌的基础液中加1Ml。2号抗生素溶液:利福平(rifampicin) 0.2g,三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐 0.2g,多粘菌素B 200 000 IU,放线菌酮(actidione) 2.0g 。将各成分置200mL容量瓶中,加入95%乙醇50mL,振摇使溶解,加入蒸馏水至200mL。过滤除菌,每100mL经高压灭菌的基础液中加1mL。
培养温度:37℃
资源保藏类型:培养物
保存方法:真空冷冻干燥法
实物状态:有实物
共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享
用途:研究、质量控制,《GB/T 4789.9-2014空肠弯曲菌检验》阳性对照菌株,《GB 4789.28 培养基和试剂的质量要求》标准菌株。
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
二、分类
空肠弯曲菌属于螺菌科,弯曲菌属,该属包括空肠弯曲菌、胎儿弯曲菌、大肠弯曲菌、海鸥弯曲菌、简明弯曲菌、痰液弯曲菌等,其中空肠弯曲菌包括空肠亚种和多氏亚种,胎儿弯曲菌包括胎儿亚种和性病亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。前者是人类腹泻最常见的病原菌之一,后者在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等。
三、形态特征
空肠弯曲菌为革薹氏阴性无芽孢杆菌,形态细长,呈弧形、S形及海鸥展翅状 菌体轻度弯曲似逗点状,长1.5-5μm,宽0.2-0.8μm,菌体一端或两端有鞭毛,一端单鞭毛多见于胎儿亚种,两端单鞭毛多见于空肠弯曲菌,运动活泼,在暗视野镜下观察似飞蝇。
四、培养特性
空肠弯曲菌在普通培养基上难以生长,微需氧菌,初次分离时需在含5% O2,85% N2,10% CO2气体环境中生长,传代培养时能在10% CO2,环境中生长,最适温度为37-42℃,在正常大气或无氧环境巾均不能生长。在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落,单个菌落呈中心凸起,周边不规则,无溶血现象。
五、生化特性
空肠弯曲生化反应不活泼,不发酵糖类,不分解尿素,靛基质阴性。可还原硝酸盐,氧化酶和过氧化氢酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢,甲基红和vp试验阴性,枸椽酸盐培养基中不生长,在弯曲菌中唯一马尿酸呈阳性反应。
六、抗原构造
本菌抗原构造与肠道杆菌一样具有O、H和K抗原。根据O抗原,可把空肠弯曲菌分成45个以上血清型,第11、12和18血清型最为常见。
七、抵抗力
空肠弯曲菌抵抗力较弱,56℃5 min即被杀死。干燥环境中仅能存活3h,易被干燥、直射日光及弱消毒剂所杀灭,对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感。
空肠弯曲菌在外环境下的存活力取决于温度,4℃时在水、粪便、尿、牛奶中可存活几周,25℃时只能存活几天或更短的时间。
八、分布范围
弯曲菌属广泛散布在各种动物体内,是多种动物如牛、羊、狗及禽类的正常寄居菌,在它们的生殖道或肠道有大量弯曲菌,其中以家禽、野禽和家畜带菌最多,其次在啮齿类动物体内也分离出弯曲菌,可通过分娩或排泄物污染食物和饮水。
九、检测方法
用于弯曲菌检测的经典方法常用的为生化鉴定方法,但检测时间长、试剂成本高、尤其空肠弯曲菌的微需氧特性,使其分离培养更为困难,需要额外的维持微需氧条件的设施和试剂,近年来,PCR等分子生物学检测方法取得了长足发展,它具有敏感性高、特异性强、检测快速等优点。本研究通过对空肠弯曲菌及结肠弯曲菌16s rRNA基因相同保守序列的扩增,来实现对样品中空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的检测。试验结果表明该方法具有较强的特异性及灵敏性能够直接从鸡肉样品中直接检测出这两种弯曲菌,具有较强的实际应用价值。
十、菌种保藏
在-20℃时一般可以保存6个月,-70℃冻干保存时间可以长达两年。
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