4%鸡红细胞的分离鉴定及其生物学特性研究！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/22 16:31

4%鸡红细胞的分离鉴定及其生物学特性研究！

一、背景

4%鸡红细胞是一种实验室常用的试剂，通常用于制备红细胞悬液。4%鸡红细胞是通过无菌采集抗凝鸡血，离心后获得红细胞沉淀，经等量PBS洗涤2~3次至上清透亮，最终用阿氏液配至4%鸡红细胞。鸡红细胞具有较大的体积和较高的密度，因此在制备红细胞悬液时具有较好的效果。4%鸡红细胞表示每1毫升鸡红细胞悬液中含有4%的鸡红细胞。

制备红细胞悬液时，通常需要将鸡红细胞与生理盐水或其他适当的溶液混合，以达到所需的浓度。4%鸡红细胞可用于制备不同浓度的红细胞悬液，如1%、2%、3%等，以满足不同的实验需求。

在实验室研究中，4%鸡红细胞常用于制备血涂片、血凝块、血液流变学等实验。此外，4%鸡红细胞还可以用于制备其他类型的红细胞悬液，如人红细胞悬液、小鼠红细胞悬液等。

需要注意的是，在使用4%鸡红细胞时，应遵循实验室安全规定，确保实验操作的安全性和有效性。同时，应根据实验需求选择合适的浓度和操作方法，以获得准确的实验结果。

4%鸡红细胞储存的条件是温度为-20℃到-70℃的低温冰箱中。如果需要长期保存，应将血清或血浆储存在-20℃到-70℃的环境中。如果需要在4℃下保存，则不能超过1个月。在解冻血清或血浆时，应确保血清或血浆完全融化，并避免反复冻融。同时，为了避免污染或容器冻裂，必须预留一定的体积空间。在进行血清学实验时，应避免使用变质的血清或血浆，因为这会影响实验结果的准确性。

二、应用

4%鸡红细胞可以用于鸡传染性支气管炎病毒（重庆株）的分离鉴定及其生物学特性研究：

为了找出确切的病原，对该致病病原进行了分离鉴定，并对其生物学特性进行了研究。病原的分离与鉴定：无菌采集病死鸡及濒死鸡严重病变肿大的肾脏制成悬液，菌检阴性后按照常规实验方法经鸡胚传代，收集6代鸡胚尿囊液，用4%鸡红细胞进行血凝试验检验是否含有新城疫病毒、流感病毒。结果表明，尿囊液与4%鸡红细胞无直接血凝性，用1％胰蛋白酶处理后4%鸡红细胞出现血凝性。将6代鸡胚尿囊液装入透析袋埋入固体PEG6000中进行浓缩纯化，经过滤除菌，滤液即为浓缩纯化的病原液。将浓缩纯化的病原液进一步经致鸡胚矮小化试验、新城疫干扰试验、动物回归试验和气管环组织培养交叉中和试验证实了分离到的病原为鸡传染性支气管炎病毒。

IBV重庆株理化性质的测定：通过半数鸡胚感染量试验测定EID50为10-6.74／mL；通过半数气管环感染量试验测得TOCID50为10-4.52／mL；氯仿敏感试验表明重庆株对氯仿敏感；乙醚敏感试验表明重庆株对乙醚敏感；热稳定试验表明重庆株对热敏感；酸碱敏感试验表明pH3.0与pH11.0的酸碱环境均可降低重庆株的毒力。用气管环组织培养交叉中和试验鉴定分离株的血清型，结果重庆株与标准T阳性血清有一定交叉反应，中和效价为1：32，与其他Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、Gray等血清型中和效价均为0，表明重庆株是一株IBV变异毒株。

IBV重庆株S1基因的克隆测序分析：提取IBV重庆株的RNA，对其S1基因应用RT-PCR方法进行了克隆与测序，使用DNAStar软件进行序列分析结果显示，重庆株的S1基因与T、Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、Gray等血清型S1基因同源性不高，分别为82.3％、77.5％、78.2％、78.6％、77.4％，进一步通过向NCBI提交重庆株的基因序列，并根据BLAST软件检索到与其具有最大同源性的毒株为比利时的B1648株，同源性高达99.6％。

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