花生粕是花生经压榨等方式制油后产生的副产品,由于花生粕中的蛋白质含量较高且氨基酸种类丰富,被广泛用于饲料中。花生粕在贮存过程中极易发生霉变而产生黄曲霉毒素且主要为黄曲霉毒素B1,黄曲霉毒素B1具有较强的毒性且有致癌的危险。
黄曲霉毒素B1的毒性要比呕吐毒素的毒性强30倍,比玉米赤霉烯酮的毒性强20倍。黄曲霉毒素B1的急性毒性是氰化钾的10倍,砒霜的68倍,慢性毒性可诱发癌变,致癌能力为二甲基亚硝胺的75倍,比二甲基偶氨苯高900倍。
所以,花生粕中黄曲霉毒素 B1含量的准确测定对于饲料质量控制具有重要意义。
花生粕作为饲料原料,GB 13078-2017 《饲料卫生标准》规定其限量为≤50μg/kg,检测方法为NY/T 2071-2011 《饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定 液相色谱-串联质谱法》,另外高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金快速定量法、时间分辨荧光免疫层析法等多种方法在花生粕黄曲霉毒素B1检测中也有大量应用。
我们在整理检测方法的过程中,发现提取溶剂的选择并不相同。花生粕中黄曲霉毒素B1检测时提取溶剂的选择主要取决于黄曲霉毒素自身理化性质, 同时也要考虑到杂质对提取以及后续的净化、检测等过程的干扰。在现行的检测方法中,所用的提取溶剂多为甲醇水或乙腈水溶液,如表1所示。
表1 饲料中黄曲霉毒素B1检测方法使用提取溶剂
检测方法 | 提取溶剂 |
GB/T 36858-2018 饲料中黄曲霉毒素B1的定 高效液相色谱法 | 84%乙腈 |
GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 | 80%甲醇 |
GB/T 17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 | 50%甲醇 |
NY/T 2071-2011 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定 液相色谱-串联质谱法 | 84%乙腈 |
NY/T 2548-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 时间分辨荧光免疫层析法 | 70%甲醇 |
NY/T 2549-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法 | 70%甲醇 |
NY/T 2550-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法 | 70%甲醇 |
为探究提取溶剂对检测结果的影响,我们进行了相关的实验(同种检测方法,不同提取溶剂;不同检测方法,同种提取溶剂)。从大量的实验对比中,花生粕使用同种检测方法不同提取溶剂检测结果差异较大,如表2所示:
表2 HPLC检测花生粕中黄曲霉毒素B1
检测方法 | 提取 方式 | 样本 | 检测 结果 μg/kg | 加标回收率 |
免疫亲和柱-高效液相色谱法 | 70% 甲醇 | 花生粕-1 | 5.9 | / |
花生粕-1+20ppb | 9.4 | 18% | ||
花生粕-2 | 7.1 | / | ||
花生粕-2+25ppb | 12.5 | 22% | ||
80% 乙腈 | 花生粕-1 | 43.1 | / | |
花生粕-1+20ppb | 62.7 | 98% | ||
花生粕-2 | 43.5 | / | ||
花生粕-2+25ppb | 71.7 | 113% |
但是使用不同检测方法相同提取溶剂检测结果差异不大,如表3所示:
表3 HPLC和LC-MS检测花生粕中黄曲霉毒素B1
检测方法 | 提取 方式 | 样本 | 检测 结果 μg/kg | 加标回收率 |
免疫亲和柱-高效液相色谱法 | 80% 乙腈 | 花生粕-1 | 43.1 | / |
花生粕-1+20ppb | 62.7 | 98% | ||
花生粕-2 | 42.7 | / | ||
花生粕-2+25ppb | 69.3 | 106% | ||
液相色谱-串联质谱法 | 80% 乙腈 | 花生粕-1 | 43.7 | / |
花生粕-1+20ppb | 63.9 | 101% | ||
花生粕-2 | 43.5 | / | ||
花生粕-2+25ppb | 71.7 | 113% |
由此得出结论:花生粕中黄曲霉毒素B1检测结果受提取溶剂影响较大。为全面防范饲料中黄曲霉毒素B1污染风险,我司ELISA检测试剂盒、胶体金/荧光快速定量检测试纸条、胶体金定性快速检测试纸条等多种快速检测产品对标NY/T 2071-2011 《饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定 液相色谱-串联质谱法》和GB/T 36858-2018 《饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法》进行了花生粕样本前处理方法的开发优化,部分数据如表4所示。
表4 华安麦科黄曲霉毒素B1快速检测产品
对花生粕样本的适应性
样本 | LC- MS/ HP LC 定值结果 μg/ kg | ELISA 试剂盒 | 荧光定量检测试纸条 | 胶体金定量检测试纸条 | |||
检测结果 μg/ kg | 回 收 率 | 检测结果 μg/ kg | 回 收 率 | 检测结果 μg/ kg | 回 收 率 | ||
花生粕-3 | 57.4 | 54.53 | 95% | 51.8 | 90% | 52.7 | 92% |
花生粕-4 | 127.0 | 126.35 | 100% | 126.9 | 100% | 114.8 | 90% |
花生粕-5 | 133.8 | 136.58 | 102% | 123.1 | 92% | 126.8 | 95% |
花生粕-6 | 168.0 | 151.25 | 90% | 151.3 | 90% | 143.4 | 85% |
*更多数据可联系我司技术工程师
华安麦科长期致力于饲料及饲料原料中真菌毒素检测,具有完善的检测解决方案。饲料原料多样,饲料成分复杂,现有检测方法有可能并不适用所有饲料原料和成品,华安麦科愿与您一起寻找解决方案,共同携手保障饲料卫生安全。
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温馨提示:使用黄曲霉毒素B1免疫学快速检测产品时,还应考虑黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)间的交叉反应率。
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