方案摘要
方案下载应用领域 | 医疗/卫生 |
检测样本 | 癌细胞/肿瘤细胞 |
检测项目 | 生化检验>成分分析, 酶 |
参考标准 | GB/T42753-2023 |
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制。
Pipetty电动移液器PCR实验中的应用
PCR :聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制。
PCR (10ul体系)
1、实验准备:
1、MSIC01-02-250 、MSIC01-02-20电动移液器各一把
2、配套吸头FDT-10A-1-TLSF、FDT-GL-200-TS
3、1.5ml去酶EP管
八联管及管盖
PCR管盒
引物
TBgreen
DEPC水
Sample
镊子
笔
2、计算:
10ul体系: 1ul cDNA + 9ul 其他
9ul其他: 0.1ul上引物 + 0.1ul下引物 + 5ul TBgreen + 3.8ul DEPC水
1个sample: 1个主孔2个复孔(3个平行孔)
1个target: sample的数量x 3(3个平行孔) + 2一般多配两个孔的量
例如 : 6个sample,4个target,每个target就是6 (6个sample) x 3(3个平行孔) + 2 (一般多配两个孔) = 20,( 0.1ul上引物+0.1ul下引物+ 5ul TBgreen + 3.8ul DEPC水)
2ul上引物 + 2ul下引物 + 100ul TBgreen + 76ul DEPC水
操作步骤
1、取出1.5ml去酶EP管,标记target,加入对应量上引物 、下引物、TBgreen、DEPC 水 ( 先加DEPC水,再加TBgreen ,最后加引物,注意枪头必须伸入液面以下并吹打均匀 )
震荡离心备用
Sample离心备用
按所需布局在PCR管盒中放置好八联管
上样 ( 注意每个孔操作保持一致,上样误差才会小)
先加 9ul其他 ( 我习惯是用 20u量程的枪沿壁加,枪头里不会有液体残留也不容易打出气泡,液体会自然流进管底,同一个target上样期间不需要换枪头,一个target加完再换下一个target ) 后加1ul cDNA ( 枪头伸入液面以下,一边打一边抬离液面)
上样结束后,盖上八联管盖,离心。
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