焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP）检测试剂盒

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加 6 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。

2、 试剂三：临用前加 6 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。

3、 试剂四：临用前取 1 支加入 0.3 mL 蒸馏水溶解备用，4℃保存一周。

4、 试剂五：临用前取 1 支加入 0.3 mL 蒸馏水溶解备用，-20℃分装保存一周，禁止反复冻融。

5、 试剂六：临用前加入 0.6 mL 蒸馏水溶解备用，4℃保存一周，也可按比例现用现配。

产品说明：

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，与磷酸果糖激酶一样催化果糖-6-磷酸的磷酸化，单 PEP 催化反应为可逆反应，并以焦磷酸代替 ATP，在光合作用碳代谢中起重要作用。

PFP 催化 6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为磷酸二羟丙酮，再由 α-磷酸甘油脱氢酶和 NADH 催化生成 3-二磷酸甘油和 NAD，340nm 处的吸光度变化反映了 PFP 的活性的高低。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL 石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，20000 g 离心 15 min，取上清置冰上待测；

2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液），

冰浴超声波破碎细胞（功率 300 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 3 min）；然后 4℃，20000 g 离心 15 min，取上清置冰上待测；

3、液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：

三、焦磷酸：果糖 6-磷酸-1 磷酸转移酶活性的计算

注意事项：

1、每次检测样本数不宜太多以免耽误过多的酶促反应时间。

实验实例：

1、取 0.1g 豆芽进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 A1 测定管-A2 测定管=1.041-0.963=0.078、A1空白管-A2 空白管=0、ΔA=（A1 测定管-A2 测定管）-（A1 空白管-A2 空白管）=0.078，按照样本质量计算酶活得：

PFP（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷(W ×V 样÷V 提取) ÷T=53.59×ΔA÷W=41.8 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！