供货周期: | 7天 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 100T/48S |
货号: | BES-2259BTK |
多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 提取液:临用前将粉剂一倒入提取液中,溶液为悬浊液,使用前需摇匀。
产品说明:
PPO(EC1.10.3.1)是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO 能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌,后者在 410nm 有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次);8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
2、称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆):直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 410nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂)
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)中准确水浴 10min 后,迅速放入沸水中加热 10min。充分混匀,5000g,常温离心 10min,收集上清,取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,410nm 处检测测定管和对照管吸光度,计算 ΔA=A 测定-A 对照。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样本的粗酶液,然后集中进行 5min 沸水浴处理。
三、PPO 活性计算
注意事项:
不同样本的多酚氧化酶最 佳的反应温度略有差别,可在 25-37℃之间进行调节。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
GelstainRedTM 核酸染料, 10,000× in water
Super GelBlueTM 核酸染料, 10,000× in water
彩色预染蛋白Marker(10-250kDa, 双色)
琼脂糖 A2015
Super ECL Plus(超敏化学发光检测试剂盒)
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)
Minerva Super Fusion Cloning Kit(无缝克隆试剂盒)
Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖检测试剂盒
彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
二安替比林甲烷
焦硫酸钾
偶氮甲碱H
硫酸钾
阿拉伯胶
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