植物类黄酮含量检测试剂盒 微量法

参考价:¥750
供货周期: 一周
品牌: 博尔森
规格: 100T/48S
货号: BES-2347BTK
CAS号:
上海博尔森生物科技有限公司
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植物类黄酮含量检测试剂盒说明书

 微量法

规格:100T/48S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

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溶液的配制:

1、 提取液:自备 60%乙醇,常温保存;

2、 标准品:10 mg 芦丁。临用前加入 1 mL 标准品稀释液配制成 10 mg/mL 标准液备用,2-8℃保存四周。

产品说明:

类黄酮是一类多苯化合物,属于植物次生代谢物,对人体具有消炎,抗菌,降血脂,清除体内羟自由基,预防癌症等作用。

在碱性亚硝酸盐溶液中,类黄酮与铝离子形成在470nm处有特征吸收峰的红色络合物,测定样本提取液在470nm处的吸光值,即可计算样本类黄酮含量。

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技术指标:

最 低检出限:0.00818 mg/mL

线性范围:0.0097-5 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎仪、30-50目筛、超声清洗仪、60%乙醇、台式离心机、研钵、蒸馏水、水浴锅/恒温培养箱。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

将样本烘干至恒重,粉碎,过 30-50 目筛之后,称取约 0.1g,加入 1mL 提取液,用超声提取法进行提取,超声功率 300W,温度 60℃,提取 30min。12000rpm,25℃,离心 10min,取上清,用提取液定容至 1mL,待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备:将10mg/mL芦丁标准溶液用标准品稀释液稀释至2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039mg/mL备用,具体稀释可参考下表。

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3. 操作表

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三、类黄酮含量计算

1. 根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。

2. 按样本质量计算

类黄酮含量(mg/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W。

3. 按样本蛋白浓度计算

类黄酮含量(mg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取) =x÷Cpr

V提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。

注意事项:

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2. 显色完成后立即测定,2小时后吸光值会下降。

实验实例:

1、 取 0.1g 处理的葡萄皮加入 1mL 提取液后超声破碎,取上清按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.365-0.116=0.249,带入标曲 y=0.3144x+0.0009,得出 x=0.789,按样本质量计算含量得:

类黄酮含量(mg/g 质量)=x÷W=0.789÷0.1=7.89mg/g 质量。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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