糖化血清蛋白含量检测试剂盒(NBT法)可见分光光度法

参考价:¥560
供货周期: 一周
品牌: 博尔森
规格: 50T/48S
货号: BES-2643BTK
CAS号:
上海博尔森生物科技有限公司
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产品详情

糖化血清蛋白(GSP)含量检测试剂盒(NBT 法)说明书

可见分光光度法

规格:50T/48S

产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

QQ截图20220615142154.jpg

溶液的配制:

标准品:临用前加入 0.8 mL 试剂二,充分溶解,配制成 10 mmol/L DMF 标准液,2-8℃保存 4 周;再取 40μL

10 mmol/L DMF 标准液和 60μL 试剂二混合配制成成 4 mmol/L 标准溶液待测。

产品说明:

血清葡萄糖与白蛋白及其它血清蛋白分子 N 末端的氨基发生非酶促糖化反应,形成高分子酮胺结构,在碱性条件下与硝基四氯唑蓝反应,生成紫红色化合物甲臜。在 530nm 波长处比色,测定其 OD 值,与 DMF 标准比较,即可求得其含量。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

血清(浆):收集血清(浆)到离心管内,按照血清(浆)体积(mL)∶试剂一体积(mL)= 10∶1 的比例(建议吸取 0.5 mL 血清(浆)于 EP 管中,加入 0.05 mL 试剂一),充分混匀,于 37℃保温 30 min。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 530 nm,蒸馏水调零。

2、 标准溶液:按照标准溶液体积(mL):试剂一体积(mL)= 10∶1 的比例(建议吸取 0.5 mL 4 mmol/L 标准溶液于 EP 管中,加入 0.05 mL 试剂一),充分混匀,于 37℃保温 30 min。

3、 按下表步骤加样:

QQ截图20220615142154.jpg

三、糖化血清蛋白含量计算

糖化血清蛋白含量(mmol/L)=C×ΔA 测定÷ΔA 标准×F= 4×ΔA 测定÷ΔA 标准×F

C:标准溶液浓度,4 mmol/L;F:稀释倍数。

注意事项:

1、显色完成后,应立即加入试剂四;建议一次性不要做太多样本,防止试剂四加入不及时导致测定结果受到影响。

2、如果测定吸光值 A>1.0 或 ΔA>0.8,建议稀释样本后再测定,计算公式中乘以稀释倍数;如果测定吸光值较低或接近空白 OD 值,建议增加操作表中的样本量后再进行测定(空白管、标准管、标准空白管需要增加至相同体积量)。

实验实例:

1、 取 0.5 mL 小鼠血清加入 0.05 mL 试剂一,充分混匀,于 37℃保温 30 min。标准溶液处理同上。按照测定步骤操作,测定后计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.315-0.002=0.313,ΔA 标准=A 标准-A 标准空白=0.29-0.092=0.198,按公式计算小鼠血清中糖化血清蛋白含量:

糖化血清蛋白含量(mmol/L)= C×ΔA 测定÷ΔA 标准=4×0.313÷0.198=6.323 mmol/L。

2、 取 0.5 mL 马血清加入 0.05 mL 试剂一,充分混匀,于 37℃保温 30 min。标准溶液处理同上。按照测定步骤操作,测定 ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.098-0.002=0.096,测定 ΔA 标准=A 标准-A 标准空白=0.29-0.092=0.198,按公式计算血清中糖化血清蛋白含量:

糖化血清蛋白含量(mmol/L)= C×ΔA 测定÷ΔA 标准=4×0.096÷0.198=1.939 mmol/L。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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