供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/48S |
货号: | BES-2662BTK |
CAS号: |
酮体含量检测试剂盒(血清、血浆、尿液等)说明书
紫外分光光度法
规格:50T/48S
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二 A 液:临用前取一支加入 1.2mL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存 3 周。避免反复冻融;
2、 试剂二 B 液:临用前取一支加入 600μL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存 3 周。避免反复冻融;
3、 试剂三:临用前取一支加入 400μL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存,可以保存 3 周。避免反复冻融;
4、 标准品 1:8mg 3-羟基丁酸钠。临用前加入 0.98mL 蒸馏水,充分溶解,即 8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液,4℃可以保存 4 周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成 0.2mg/mL 标准溶液待用,即为标准溶液 1;
5、 标准品 2:8mg 乙酰乙酸锂。临用前加入 0.95mL 蒸馏水,充分溶解,即 8mg/mL 乙酰乙酸锂标准溶液,-20℃可以保存 4 周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成 0.05mg/mL 标准溶液待用,即标准溶液 2;
6、 BOH工作液配制:临用前根据试验所需量将试剂一A液、试剂二A液 、试剂三按照850μL:40μL:10μL(共900μL,1T 的量)的比例配成工作液,充分混匀,置于 37℃保温 15min(此步骤不可省略),现用现配,工作液在 4h 内用完;
7、 AcAc 工作液配制:临用前根据试验所需量将试剂一 B 液、试剂二 B 液、试剂三按照 870μL:20μL:10μL(共900μL,1T 的量)的比例配成工作液,充分混匀,置于 37℃保温 15min(此步骤不可省略),现用现配,工作液在 4h 内用完。
产品说明:
酮体是肝脏脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸(AcAc)、β-羟丁酸(BOH)及丙酮三者统称。酮体中丙酮的生成量相当小,生成后即被吸收。乙酰乙酸和 β-羟丁酸则经血流进入肝外组织,在此被氧化,经柠檬酸循环提供更多能量给那些组织使用,例如骨、心肌和肾皮质。
在 pH 7.0 和 37℃条件下,BOH 在 β-羟丁酸脱氢酶(HBDH)催化下脱氢生成乙酞乙酸,同时 NAD+被还原成NADH;在 pH 8.8 和 37℃条件下,AcAc 被 HBDH 还原为 3-羟基丁酸酯或脱羧生成丙酮,同时 NADH 被氧化成NAD+,NADH 在 340nm 波长下有特征吸收峰,通过检测在 340nm 波长下的吸光值变化可以计算出 BOH 和 AcAc的含量,从而计算出样本中酮体的含量。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、可调式移液器、水浴锅/恒温培养箱、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
血清(浆)、尿液等液体样本:直接测定。(若有浑浊可以离心取上清后测定)
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,用蒸馏水调零。
2、 BOH 含量测定:
3、 AcAc 含量测定:
三、酮体含量计算
注意事项:
1. 如果测定初始吸光值>1.5 或 ΔA>0.2,建议将样本用蒸馏水稀释后再测定。计算公式中乘上稀释倍数;
2. 如果 ΔA 接近空白值,建议加大样本量,同时保证反应体系总体积不变,相应减少工作液加样量后测定。例如,若增大样本量为 200μL,则工作液调整为 800μL。标准管与样本管加样体系应保持一致,计算公式不变。
实验实例:
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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