供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 250mL |
货号: | BES232095ME |
CAS号: |
Bradford法蛋白定量试剂盒
产品及特点 Bradford 法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一,在酸性条件下, 考马斯亮蓝(Coomassie G-250)染料能与蛋白质结合形成复合物,其最大吸光 值也由 465 nm 转移到 595 nm,通过颜色的强弱即可测定蛋白质浓度的高低。本 产品是基于 Bradford 法蛋白检测原理开发的产品,具备下述特点:
1. 快速,10-20 个样品只需要 10 分钟即可完成测定。
2. 稳定,加样混匀后 2 分钟既可测定,1 小时内吸光度变化不超过 10%。
3. 线性范围在 50~1000 µg/mL。
4. 最小测量体积为 1-20 uL,最低测量蛋白量为 0.5 ug。
5. 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
6. 有常规和微量两种检测模式
7. 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达 1M,二硫苏 糖醇的浓度可高达 5mM。
8. 受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
9. 本产品至少可以按常规法测 200 次,按微量法测 1000 次。
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存,BSA 标准需低温运输、-20℃保存,有效期一年。
自备仪器试剂 超纯水、分光光度计
使用方法 一:制备溶液 A 工作液
1、 将试剂盒提供的Bradford 法蛋白定量溶液 A 与自备超纯水按 1:4 比例充分混 合即为溶液 A 工作液 (例:4 mL 溶液 A + 16 mL 超纯水= 20 mL 溶液 A 工 作液)。每次配制多少取决于检测方法和测试体积,需要预先按下面手册计算。
2、 用本试剂盒提供的滤纸过滤溶液 A 工作液。过滤后的工作液室温条件下可稳定 使用 1-2 星期。注意:不同型号、规格的滤纸,具有不同的孔径,导致可通过 的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸,否则会导致不同的测定结果。
二、制备 BSA 标准品梯度稀释液
3、 测试开始之前,应首先制备 BSA 标准品梯度稀释液。本试剂盒使用 BSA 作为 标准品。用户也可以使用自备的其他蛋白质浓度测定用标准品。每个浓度具体 需要多少体积取决于检测方法和测试体积,需要预先按下面的手册计算。没有 用完的 BSA 标准品梯度稀释液可以放-20℃待下次使用。
a) 如果进行常规检测,建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA(2 mg/mL) 稀释成下面的 8 个浓度:
0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、 500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL
b) 如果进行微量检测,建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA(2 mg/mL) 稀释成下面的 6 个浓度:
0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。
三、常规检测流程
常规检测法在蛋白浓度 30 - 1000 µg/mL 范围内呈现 R2 = 0.996 的直线线 性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
4、 在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 8 个 BSA 梯度稀释液,然后 再在每个离心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。终体积多少取决于比色 杯的体积。
如果用 3 mL 比色杯检测,则取 100 µL 样品+5 mL 溶液 A 工作液;
如果用 1 mL 比色杯检测,则取 40 µL 样品+2mL 溶液 A 工作液;
如果用平底透明 96 孔板,则取 20 µL 样品+1 mL 溶液 A 工作液。
5、 样品与溶液 A 工作液混合后,充分震荡 30 秒混匀。
6、 室温放置 5 分钟。
7、 分光光度计检测吸光度。波长设定= 595nm。用 96 孔板测定时,应确保没有 气泡,否则气泡会绝对增加吸光度的读数。
8、 将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得 到待测样品的蛋白质浓度。
四、微量检测流程
此方法在蛋白浓度 1~20 µg/mL 范围内呈现 R2 = 0.992 的直线线性回归, 可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
9.在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 6 个 BSA 梯度稀释液,然后再在每个离心管中按 4:1 的比例(注意:不是 1:50)加入溶液 A 工作液。终 体积多少取决于比色杯的体积。
如果用 3 mL 比色杯检测,则取 4 mL 样品+1 mL 溶液 A 工作液;
如果用 1 mL 比色杯检测,则取 2 mL 样品+0.5 mL 溶液 A 工作液;
如果用平底透明 96 孔板,则取 400 µL 样品+100 µL 溶液 A 工作液。
10.样品与溶液 A 工作液混合后,充分震荡 30 秒混匀。
11. 室温放置 5 分钟。
12. 分光光度计检测吸光度。波长设定= 595nm。用 96 孔板测定时,应确保没有 气泡,否则气泡会绝对增加吸光度的读数。
13. 将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得 到待测样品的蛋白质浓度。
注意事项
1、 BCA 法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应 会因温度升高而加快。所以,如果蛋白质浓度较低,可以改在 60℃孵育 30 分钟或更长。
2、 待测样品浓度在 20~2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3、 在一定浓度范围内 BCA 法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响:
4、 本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响,所以需确保 EDTA 浓度不高于 10mM,二硫苏糖醇不高于 1mM,β-巯基乙醇不高于 1mM,没有任何 EGTA,否则建议使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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