供货周期: | 现货 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 0.75ml |
货号: | BES26031C |
CAS号: |
脂质体 2000 转染试剂
Lip2000 Transfection Reagent
产品规格:0.75ml / 1.5mL
保存条件:2-4℃保存一年(避免冷冻)
产品简介:
Lip2000 是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA 和 RNA)转染入真核细胞,具有低细胞毒性;对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率;转染时血清的存在不影响转染效率的优点。适用范围:贴壁细胞和悬浮细胞(脯乳动物细胞系)的转染。
质粒 DNA 转染:
对大多数细胞来说,DNA(μg)与 Lip2000(μI)的比例为 1:2~3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。
1. 以 24 孔板为例
a. 贴壁细胞:转染前一天,用 500 μI 不含抗生素的培养基接种 0.5-2×105 细胞,使之 天能达到 70-90%汇合。
b. 悬浮细胞:在准备 DNA-Lip2000 复合物之前,用 500 μI 不含抗生素的培养基接种 4-8×105 细胞即可。
2. 对每个转染样品,进行以下操作
a. 在 eppendorf 管里分别加入 50 μI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium 和 0.8 μg DNA,轻柔混匀,制成 DNA 稀释液。
b. 在另一个 eppendorf 管里分别加入 50 μI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium 和 2.0 μI Lip2000(注意用前 先混 匀),轻柔混匀,制成 Lip2000 稀释液,室温静置 5 分钟。
c. 将 DNA 稀释液和 Lip2000 稀释液混合,轻柔混匀,室温静置 20 分钟,形成 DNA-Lip2000 复合物。DNA-Lip2000 复合物在室温下可稳定存在 6 小时。
3. 将 DNA-Lip2000 复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。
4. 在 37℃ 二氧化碳培养箱中培养 4-6 小时后更换培养基,继续培养 18-48 小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株,则在转染 24 小时后将细胞按照 1:10 或更高的比例接种到新鲜培养基中, 天加入选择性培养基进行筛选。
质粒 DNA 转染的优化为达到 的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对 DNA 和 Lip2000 的比例以及细胞密度进行优化,一般在 1: 0.5~5 的范围内优化 DNA (μg)和 Lip2000(μI)的比例。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及 Lip2000 用量
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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