一、什么是同型对照抗体?
同型对照(Isotype Control)指与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合而产生的背景信号。
二、为什么使用同型对照?
抗体在结构上都极其相似,大部分是恒定区,只有一小部分可变区不同,决定其与抗原的特异性结合。抗体分子结构的恒定区由保守区构成,在同型的抗体中其序列往往相同。
而抗体保守区是决定抗体作用机制的关键,其中的Fc region能参与调控并结合各类细胞上的Fc受体。所以同型对照(Isotype Control)可用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的假阳性干扰。同型对照也是阴性对照,其主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。
三、同型对照用于哪些实验?
1.流式细胞实验
同型对照一直是流式细胞术中最常用的阴性对照之一。同型对照可模拟FcR或其他蛋白非特异性结合和染色,还可以用于设定流式细胞仪的电压,有效节约实验成本。
染色方式为:样本管:一抗+样本,同型对照管:同型对照+样本。
在以下情况中,实验人员必须使用同型对照确保流式实验的准确性:
● 实验人员流式经验较少
● 进行胞内蛋白流式实验,针对细胞内靶标的抗体即使不与抗原结合,也常常会出现被拦在细胞内。
● 实验不常见或特异性不高的抗体
2.免疫荧光和免疫组化,当同型对照的显色信号弱于特异性抗体,才能说明是抗体和样本中的目标蛋白结合。
3.IP(免疫沉淀)实验,下图的control IgG为同型对照,同型对照样本只能检测到抗体的重链条带,没有目的蛋白条带。
4.Elisa实验检测某种特异抗体时,可用同型对照排除非特异结合。
四、如何选择同型对照?
货号 | 产品名称 |
FNSA-0130 | Normal mouse IgG Control |
FNSA-0131 | Chicken IgY-Isotype Control |
FNSA-0133 | Goat IgG-Isotype Control |
FNSA-0134 | Rat IgG-Isotype Control |
FNSA-0109 | Normal Human IgG Control |
FNSA-0106 | Normal Rabbit IgG Control |
前列腺素E2(PGE2)信号通路及其生物学功能概述
流式细胞术的原理与应用
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