细胞消化的小技巧http://www.yajimall.com/article/aboutus.html
不一定要一次把所有细胞都要消化下来!
晃动培养盘并在显微镜下用肉眼观察,只要70~80%细胞都收缩了或超过适合消化时间,就该终止消化反应,如果细胞量够即可进行后续传
代或实验步骤;如果细胞量不够,则可视情况用不含钙、镁离子的平衡盐溶液清洗仍贴壁的细胞,再进行一次消化反应。
▲ 消化不下来的细胞(黄)请视情况决定是否再消化一次。
不一定要吹打成W全单细胞悬液!
一般细胞脱离培养底物、并经过5~10次轻柔吹打后,会在细胞悬液里形成小规模聚集(约5~10颗细胞),所以不需要过度延长消化时间想让
细胞分离成单细胞悬液。
消化效果不佳,先提升消化液浓度、再加长作用时间!
当你选定了一种消化方式 (物理机械法除外),发现效果不佳,首先应考虑提高EDTA或胰酶浓度,效果再不佳才加长消化的作用时间,避免
细胞长时间浸泡在消化液中造成的细胞膜损伤。
(一般消化液使用:0.02%~0.04% EDTA作用5-20分钟;0.2~0.5% 胰蛋白酶作用1~5分钟)
结语
细胞消化 ,是一个看似很简单,但是有很多技术含量的步骤。消化好坏、是否污染、有无受伤,都在这短短的五六分钟里决定。
当我们已经可以顺利操作细胞培养实验,接下来要思考的,就是如何让细胞长得更健康、更均一、做出来的实验才会更好。
祝各位的细胞都颗颗透亮、粒粒分明、活力旺盛!
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