核酸酶

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核酸酶相关的厂商

  • 深圳市奥美顿科技有限公司
    深圳市奥美顿科技有限公司，坐落于创新之都深圳。坚持自主创新，做中国品牌。致力于通过创新的产品和技术整合，提供精密的实验室仪器以及非标自动化仪器的研发与生产。公司自行建立了一只强有力的研发团队，创始人员均具有多年的实验室仪器以及非标自动化研发经验，目前为止已获得多项专利。一直以来，以“细节成就价值”为公司理念，秉承严谨的科学态度，严格的质量管理，经过近几年的努力，已经自主研发了核酸提取仪、自动分液仪、半自动封膜仪、台面式吸头装盒机、移液工作站、磁力架等多种生命科学仪器且成熟稳定，并形成了集软件开发、技术研发、组装生产、销售服务于一体的专业化企业。产品覆盖科研，临床检验，基因组学，疾控系统，食品安全，法医等领域。
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  • 北京怡美通德科技发展有限公司
    北京怡美通德科技发展有限公司成立于2003年，专业从事生命科学领域的仪器设备和试剂代理分销以及相关技术服务，多年来通过与多个国际著名生物技术产品制造商的合作建立了完善的营销渠道与服务体系。曾服务过上百家客户，其中包括北京大学、清华大学、中国科学院、中国医学科学院、首都医科大学、北大医学部等科研单位，协和医院、阜外医院等医院，以及科技服务公司、生物技术公司、制药企业等众多企业客户。公司目前主要代理的品牌及产品包括：1. 美国10x Genomics公司生产的Chromium单细胞测序建库系列产品，Visium空间转录组系列产品以及Xenium组织空间原位分析系统；2. 深圳华大智造公司生产的高通量基因测序仪系列产品、自动化文库制备系统、自动化核酸提取系统和自动化分杯处理系统等；3. 美国IDT公司生产的高通量测序捕获探针、克隆基因、基因片段及寡核苷酸池等产品；4. 瑞士Tecan Genomics（原NuGEN）的高通量测序建库系列产品；5. 深圳瑞沃德生命科技有限公司生产的自动细胞计数仪、单细胞悬液制备仪等产品同时提供所有代理产品配套的试剂耗材供货、产品演示实验、产品安装、使用培训以及售前售后技术咨询、生物信息学分析等相关技术服务。获得详细信息可按下列方式联系我们：官网：www.emtd.com.cn电话：010-84409661Email：marketing@emtd.com.cn
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  • 洛阳吉恩特生物科技有限公司
    洛阳吉恩特生物科技有限公司创立于2015年，立志于“自动化核酸提取方案”的推广与普及，拥有多项国家专利，是以纳米生物磁珠为核心，整合磁珠法试剂盒、核酸自动提取仪的高科技研发生产型企业。 吉恩特生物以产品质量为生存之本，围绕硅羟基磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠、链霉亲和素磁珠建立了自主知识产权的生产线，独立标准的生产环节与严格细致的生产工艺，将产品稳定性做到极致，为广大用户提供放心、稳定的高质量产品。 经过不断的努力，公司的产品目前已广泛应用于体外诊断、一代测序、高通量测序等多个领域，具备成熟的血液、血清、唾液、拭子等多种样本的自动化核酸提取方案，提取结果可直接进行下游实验。 我们不断创新，我们不断超越，是吉恩特生物所有员工的态度，我们将会在自动化核酸提取领域为您提供更稳定，更舒心的产品与服务。
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核酸酶相关的仪器

  • CHOZN® 锌指核酸酶修饰GS-/-CHO细胞株 400-622-8982
    CHOZN GS-/-是采用Sigma独有的CompoZr锌指核酸酶（ZFN）技术建立的细胞株。ZFNs是一类工程DNA结合蛋白，它通过结合用户指定的位点并造成双链断裂（DSB），从而实现靶向基因的编辑。其后，细胞可采用内源性DNA修复过程，非同源性末端接合（NHEJ），或同源介导的双链修复来修复目标双链断裂处。这些修复过程可以被引导以产生精确的靶向基因编辑，从而形成特定基因缺陷（敲除），整合或修饰的生物体或细胞株。谷氨酰胺合成酶（GS）是生物制药行业中最常用的筛选标签之一。通过将重组蛋白的编码基因的表达与外源GS基因的表达偶联，生产重组蛋白的细胞株可以被筛选出来。在GS缺陷宿主细胞之中，只有那些成功转染外源GS基因的细胞在缺乏谷氨酰胺条件下培养才能存活。在具有内源性GS基因的宿主细胞中，可以使用MSX（甲硫氨酸砜亚胺）来抑制内源GS活性，使得这些细胞系可以使用GS筛选。然而在生物制药行业中，无MSX工艺更具优势。为了实现无MSX GS筛选，我们需要一种GS敲除的宿主细胞株。利用ZFN技术，SAFC设计了一种新的CHO K1 GS-/-细胞株。这种CHOZN GS-/-细胞株适合在化学成分限定EX-CELL CD CHO Fusion培养基中悬浮培养，并保持了野生型CHO K1的稳健特性。特点与优点：- 首个商业化的GS-/-CHO细胞株- CHOZN GS-/-是使用ZFN技术靶向突变开发的细胞株- 适合在化学限定，无动物源成分的培养基中悬浮培养的细胞系- 细胞源自于ECACC CHO K1- cGMP标准生产，完善的病毒检测，完整的可追溯资料- 全面的实验方案，为您详细说明筛选策略- 技术专家随时为您排除问题了解更多，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： 默克/Merck
    型号： CHO细胞平台 - 细胞株
    价格： 面议
  • 超纯水仪MicroPure 400-825-5669
    智能特征可调节背光式显示屏，易于查看灵活的速度调节可选的6升纯水箱，无需将系统直接连接至水管线进水水质监测优质的进水水质保证持续的超纯水供应，并在最大程度上延长滤芯使用寿命设计巧妙再循环泵可防止在待机期间滋生细菌，而且对限值持续监测，当运行发生错误时，会显示错误信息各系统所需的减压阀、超纯水滤芯和0.2 µ m无菌过滤器，均配备齐全出色的过滤系统超滤器能自动冲洗以最大程度截留内毒素和核酸酶，使用寿命长达两年。经验证的0.2µ m终滤器带有褶膜，消毒效果多达五倍RNase：0.003ng/ml；Dnase：0.4pg/μl　MicroPure基础分析型MicroPure UV有机分析型MicroPure UF生化分析型MicroPure UV/UF生命科学型应用AA,IC,ICP,缓冲液等无机衡量分析，有机衡量分析，HPLC,ICP-MS,IC,TOC分析分子生物学，微生物学，PCR,IVF,单抗等分子生物学，PCR,DNA,单抗，细胞培养等电阻率@M&Omega -cm18.2电导率 &mu s/cm0.055TOC ppb5 - 101 - 55 - 101 - 5细菌 CFU/Ml 1颗粒 0.22&mu m/mL 1内毒素 EU/mLn/an/a 0.001 0.001流量 L/min&le 1功率 ( KW )0.06外部尺寸宽 × 深 × 高 （mm）305 × 300 × 455外部尺寸(带水箱) 宽 × 深 × 高 （mm）305 × 400 × 455货号50132366501323735013236850132370加配6升水箱50132367501323745013236950132372进 水 需 求源水反渗透水，去离子水，蒸馏水进水电导率 (&mu s/cm) 5 TOC (ppb)&le 50细菌 (CFU/mL) 100浊度 NTU 1.0温度 (℃)2 - 35压力 (bar)0.1 - 6*请根据使用手册来查询更多详细的进水水质需求信息选 配 件品 名 描 述货 号离子交换柱 DI 1500如果采用RO进水后，用于延长之后超纯化柱的使用寿命 02.1500打印机符合GLP标准，RS-232接口打印机 09.2207MicroPureIQOQ认证IQ OQ 认证 IOQDOCE50133913MicroPure + 30L纯水箱 IQOQ认证IQ OQ 认证 IOQDOCE50133914挂墙组件将MicroPure挂墙的选配件 09.2212消毒柱用于消毒MicroPure纯水系统，需要配置消毒包一道使用 09.1102常 用 耗 材超纯化柱MicroPure用超纯化离子交换柱09.1006终端0.2&mu m微滤用于超纯水终端过滤微生物和颗粒物09.1003超滤滤芯用于去除内毒素，核酸酶，微生物，颗粒等50133981紫外灯185/254 nm 双波长紫外灯灯管09.1002消毒包消毒剂 09.2202
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    厂商： 赛默飞中国实验室产品事业部
    品牌： 赛默飞/Thermo Fisher
    型号： MicroPure
    价格： 3万 - 5万元
  • 和泰超纯水机Pilot 400-622-3120
    产品简介Medium touch系列以城市自来水为水源，可方便快速的制造RO反渗透水、DI去离子水和UP超纯水，在Medium的基础上进行了全面的系统优化和技术升级，集成触摸屏控制系统，增加双路定量取水功能，定位于为中心实验室、楼宇中央供水、中试车间、小型量产车间及相关用水量较大的领域提供纯水解决方案。现有Medium Touch-Q/S/RO/RQ/RS/1600Q/1600S 共7个子产品系列，系统产水量区间为：45-250升/小时，超纯水电阻率达到18.2MΩ.cm，完全符合GB/T 6682-2008、GB/T33087-2016、ASTM、CAP、CLSI、EP和USP制定的水质标准。特点与优势5.0寸彩色触摸屏，动画式菜单，实现指尖触控的操作新体验3路水质监控，实时监测源水、RO反渗透水、DI去离子水/UP超纯水水质，无需取水即可查看水质2路定量(10-999999ml)、定质(1~18.25MΩ.cm)取水功能超纯水循环系统可自由启动、关闭，保持系统的低细菌污染水平超纯水全管路消毒程序，可手动执行“循环消毒”、“取水口消毒”、“水箱补水”、“手动排污”、 “停止消毒”PP、KDF、AC、RO、UP、UF、TF、UV的耗材寿命可设定，可显示已使用时间，到期自动提醒更换系统时间设定(年/月/日/时/分)、定时待机(0~60min)、定时关机(0~24hour)功能缺水、水满报警，源水、RO反渗透水、DI去离子水/UP超纯水超标报警兼容压力水桶和液位水箱2种纯水储存方式，可直接显示水箱储水量，满足不同的应用需求工厂、客户二级密码，系统设置均由密码保护，防止未经授权的更改全自动RO膜防垢冲洗(可设定冲洗间隔时间和持续时间)及手动强制冲洗程序，延长RO膜使用寿命记录及随时查看耗材更换时间，全面掌握设备维护信息完善的信息查询及数据管理功能，全面掌控系统运行状态、水质、耗材使用、及时报警、历史报警等信息系统自带存储卡，自动记录一年的运行数据，可设定时间范围通过USB接口进行完整的数据导出内置2只15升压力水桶，节省实验室空间，安装维护更加方便，可加配外置大容量储水桶，满足不同水量需求不锈钢喷塑机箱，杜绝腐蚀和生锈，确保机体的清洁，符合GLP规范落地式设计，底部设有活动、固定支脚，安装、移动更加方便内部预留空间，可加装循环输送系统，作为中央供水设备使用。纯水管路、接头均获NSF认证优化的RO膜组件设计，采用美国陶氏DOW原装进口RO膜片，实现了RO膜的长寿命与高品质水质的结合大容量超纯化柱技术，实现少量树脂即可大幅度提升水质，采用美国陶氏DOW原装进口核子级树脂，时刻保证纯水品质双波长(185nm&254nm)UV紫外灯组件(进口灯管)，有效杀菌，降低TOC，增强系统适用范围MWCO5000DUF超滤组件(原装进口)，有效去除内毒素(即热原)，可用于精密的细胞培养和IVF0.2μm进口PES聚醚砜复合滤膜终端除菌过滤器，保证水质无菌技术参数Pilot-Q去离子纯水机型号产水量电阻率电导率重金属离子 细菌颗粒物(0.2μm)Pilot-Q30045升/小时10-18.2MΩ.cm0.1-0.055 μs/cm0.1 ppb0.01 cfu/ml1/mlPilot-Q40063升/小时10-18.2MΩ.cm0.1-0.055 μs/cm0.1 ppb0.01 cfu/ml1/mlPilot-Q60094升/小时10-18.2MΩ.cm0.1-0.055 μs/cm0.1 ppb0.01 cfu/ml1/mlPilot-Q800125升/小时10-18.2MΩ.cm0.1-0.055 μs/cm0.1 ppb0.01 cfu/ml1/mlPilot-S超纯水机型号产水量电阻率重金属离子总有机碳(TOC)细菌热源颗粒物核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶(内毒素)(0.1μm)(RNases)(DNases)Pilot-45、63、94、125升/小时18.2MΩ.cm@25℃0.01100.01N/A1/mlN/AN/AS300/400/600/800ppbppbcfu/mlPilot-45、63、94、125升/小时18.2MΩ.cm@25℃0.01100.010.0011/ml15S300/400/600/800UFppbppbcfu/mlEu/mlpg/mlpg/mlPilot-45、63、94、125升/小时18.2MΩ.cm@25℃0.0130.01N/A1/mlN/AN/AS300/400/600/800UVppbppbcfu/mlPilot-45、63、94、125升/小时18.2MΩ.cm@25℃0.0130.010.0011/ml15S300/400/600/800UVFppbppbcfu/mlEu/mlpg/mlpg/mlPilot-R双级反渗透纯水/超纯水机型号产水量其他纯水指标Pilot-RO30、45、60、90升/小时RO系列：30/45/60/90一级RO水(TDS)：电导率≈源水电导率×5%，二级RO水(TDS)：1-5μs/cm(电导率≤源水电导率×2%)有机物截留率99%(当MW200道尔顿)；颗粒和细菌截留率99%Pilot-RQ30、45、60、90升/小时RQ系列：30/45/60/90电阻率：10-18.2MΩ.cm，重金属离子0.01 ppb，细菌0.01cfu/ml，颗粒物(0.2μm)1/mlPilot-RS30、45、60、90升/小时RS系列：30/45/60/90 UF/UV/UVF电阻率：18.2MΩ.cm@25℃，重金属离子0.01 ppb，细菌0.01 cfu/ml，颗粒物(0.2μm)1/ml，总有机碳(TOC) 10 ppb*** (UV/UVF型：TOC3 ppb***)，UF/UVF型：热源0.001 Eu/ml，核糖核酸酶(RNases)1pg/ml，脱氧核糖核酸酶(DNases)5pg /ml*进水水质将影响纯水的质量和滤柱的寿命
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    厂商： 上海和泰仪器有限公司
    品牌： 和泰/HHitech
    型号： Pilot
    价格： 5万 - 10万元
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  • Nature | 基因编辑工具箱或再添神器——TnpB核酸内切酶
    转座在生物体基因重塑过程中具有关键性的作用。IS200/IS605 和 IS607 家族的插入序列（insertion sequences, ISs）是最简单的可移动遗传元素之一，仅包含其转座和调节所需的基因。2021年9月9日，张锋团队在Science杂志上发表了一篇题为 The widespread IS200/605 transposon family encodes diverse programmable RNA-guided endonucleases 的文章（详见BioArt报道：Science | 张锋团队再发文：源于IS200/605转座子家族的多种核酸酶或可成为基因编辑新工具）【1】，重建了CRISPR-Cas9系统的进化起源，发现了3种高度丰富但功能未知的转座子编码的可编程RNA引导核酸酶：IscB、IsrB和TnpB，并对IscB的蛋白功能进行了详细探究。该研究还发现TnpB可能是CRISPR-Cas9/Cas12核酸酶的祖先，推测TnpB也具备RNA引导的核酸酶活性。近日，来自立陶宛维尔纽斯大学的Virginijus Siksnys团队（CRISPR开创者之一，通过研究CRISPR-Cas9 生化性质，得出了Cas9酶可以定点切割DNA的结论，特别致敬CRISPR幕后的英雄们——最全的一份CRISPR英雄谱）在Nature杂志上在线发表了题为Transposon-associated TnpB is a programmable RNA-guided DNA endonuclease的研究论文。研究人员通过一系列生化实验证实CRISPR-cas核酸酶的祖先TnpB是可重编程的 RNA 引导的功能性核酸酶。TnpB通过reRNA（right element RNA，长非编码RNA，来源于ISDra2转座子中的RE元件）引导去切割靠近TTGAT转座相关模块（Transposon associated motif, TAM）5’端的DNA，并可以切割人类基因组DNA。如图1所示，IS200/IS605家族的Deinococcus radiodurans ISDra2中包含tnpA和tnpB基因，以及位于两侧的LE（Left element）和RE（Right element）。在纯化TnpB的过程中，作者发现有许多RNA也被一同纯化。对TnpB结合的RNA进行small RNA测序（sRNA-seq）分析，发现它们大多是长度约为150nt的长非编码RNA，来源于ISDra2中的RE序列，作者将这些RNA称为reRNAs（right element RNA）。reRNA 3’端的16nt来源于IS200/IS605转座子的侧翼DNA序列，其余序列与TnpB基因的3’端和RE序列匹配，说明TnpB可以与转座子3’端来源的reRNA形成RNP复合物。图1. D. radiodurans ISDra2位点PAM（protospacer adjacent motif）序列是Cas9或Cas12核酸酶启动DNA切割所必须的，那么TnpB发挥作用可能也需要类似的序列。通过PAM鉴定实验【2】，作者观察到在目标基因5’端上游富集了大量的TTGAT序列，并称之为Transposon Associated Motif (TAM)。体外DNA切割实验证实TnpB具备RNA引导的靶向dsDNA的核酸酶活性。进一步分析发现，将TnpB序列中的RuvC-like活性位点突变后，TnpB失去了切割能力，说明RuvC模块与TnpB的活性相关。研究人员发现实现TnpB的DNA切割功能需要同时满足两个条件：（1）TAM序列；（2）与靶基因匹配的位于reRNA 3’端的序列。随后，作者对切割产物进行了测序分析，结果显示，TnpB采取的是一种交错切割模式，在NTS（non-target strand）的多个位置和 TS (target strand) 的单个位置进行切割，最终产生5’-悬挂端（overhangs）（图2）。图2. TnpB-reRNA复合物切割双链DNA的实验设计及流程最后，作者探究了TnpB在细胞内切割目标dsDNA的能力。首先，在E.coli中进行的质粒干扰实验表明TnpB可以在原核生物体内切割dsDNA。紧接着，作者想知道TnpB是否可以应用于切割人类基因组。将编码TnpB和reRNA的工具质粒转染至HEK293T细胞中，72小时后，提取基因组DNA（gDNA）测序分析目标切割位点中的序列插入和删除（insertions and deletions，indels）情况（图3）。实验结果显示，TnpB在两个测试靶点（AGBL1-2和EMX1-1）中引入突变的频率为10%-20%，这与之前报道过的CRISPR-Cas9和Cas12的效率类似【3-7】。进一步分析发现，切割位点引入的删除突变占主导地位，与Cas12切割谱中观察到的现象类似【5,7】。这些结果说明RNA引导的TnpB核酸酶可以切割真核生物的基因组DNA。图3. 利用TnpB编辑人类基因组综上所述，该研究从ISDra2系统中鉴定了一个新的具有dsDNA切割功能的核酸酶TnpB，其在原核和真核细胞中均能有效切割dsDNA，具有编辑人类基因组的巨大潜力。在进化树上，虽然TnpB与微型 Cas12f核酸酶的关系最为紧密，但作者认为两者之间依旧存在重大区别：（1）TnpB与Cas12f使用的guide RNA不同；（2）TnpB是单体，仅需要一个reRNA；而Cas12f 核酸酶是二聚体，需要结合一个拷贝的crRNA-tracrRNA duplex；（3）TnpB需要TAM序列，Cas12f需要PAM序列，两种序列截然不同。原文链接:https://doi.org/10.1038/s41586-021-04058-1
    时间： 2021-11-01
    作者： dahua1981
  • 核酸降解知多少
    导语在实验过程中，最心累的莫过于好不容易提取的核酸却降解了。那么核酸为什么会发生降解呢，我们又该如何预防呢？关于核酸降解，你了解多少呢？让我们一起对核酸降解一探究竟吧。 什么是核酸 核酸是一种高分子化合物，核苷酸是构成核酸的基本单位。核酸水解后得到许多核苷酸，核苷酸是组成核酸的基本单位，即组成核酸分子的单体。一个核苷酸分子是由一分子含氮的碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成的。根据五碳糖的不同可以将核苷酸分为脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。如果5-碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果5-碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。 核酸降解本质 核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。核苷磷酸化酶：能分解核苷生成含氨碱基和戊糖的磷酸酯酶。广泛存在于生物体内,催化的反应可逆。可在核苷水解酶作用下继续分解核苷成嘌呤碱、嘧啶碱和戊糖。核苷水解酶：主要存在于植物和微生物体内，只水解核糖核苷。 核酸降解原因 DNA降解的因素很多，主要分为物理因素，化学因素和生物因素。一、物理因素：温度，机械剪切力、核酸的反复冻融、高温煮沸及辐射等。二、化学因素：PH值，水解反应，氧化反应等。三、生物因素：酶解及微生物侵染等作用。一、物理因素的影响★ 温度：高温条件下，RNA不稳定，易加速磷酸二酯键的水解，使核酸降解；★ 机械剪切力：包括剧烈震荡、搅拌、细胞突然至于低渗溶液中，以及让溶液快速通过狭长的孔道；★ 核酸的反复冻融、高温煮沸及辐射等，均会导致核酸的降解。二、化学因素影响水解★ PH值：氢离子参与催化磷酸二酯键、糖苷键的水解，但糖苷键比磷酸二酯键更易被酸水解。过高或过低的PH值都易破坏复键。核酸(特别是RNA)在碱性溶液中十分容易降解；★ 氧化反应：会氧化碱基中的含氨杂环，使其变性，从而改变一级与二级的核酸构象；★ 苯酚在空气中被氧化生成醌，它能够产生自由基，直接用于DNA的分离，会使磷酸酯键断裂，造成DNA的降解。三、生物因素影响★ 酶解：核酸酶可以催化水解多聚核苷酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，使其降解。1.核酸酶(磷酸二酯酶)核酸内切酶：在环境或生物体内具有识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶统称为限制性核酸内切酶。作用方式从多聚核苷酸链中间开始，在某一个位点切断磷酸二酯键。如DNase，RNase等。核酸外切酶：核酸外切酶的作用方式是从多聚核苷酸链的一端(3' -端或5' -端)开始，逐个水解切除核苷酸。如蛇毒磷酸二酯酶，牛脾磷酸二酯酶等。2.核苷酸酶(磷酸单酯酶)专一性的磷酸单酯酶：3' -核苷酸酶，5' -核苷酸酶非专一性磷酸单酯酶。★ 微生物侵染：微生物会将DNA作为营养物质或是其分泌的化学物质含酶。 预防降解的方法 预防RNA降解的方法:★ 去除环境中RNase酶的污染或强有力地抑制其活性。★ 获取样品后最好立即提取RNA，若无条件立即实验，应于-80℃液氮中保存样品，提取时取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞，以防RNA降解。★ 在总RNA提取分离的最初阶段，联合使用Rnase的特异抑制剂，尽可能的灭活胞内的Rnase的活性。★ 避免样品的反复冻融。★ 保证裂解液的质量，裂解液的用量不足，也会导致RNA降解。★ RNA提取后，放入-80℃保存，防止降解。预防DNA降解的方法:★ 简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；★ 减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏；★ 防止基因组DNA的生物降解，主要是DNase降解基因组DNA，Dnase需要二价金属阳离子Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离子整合剂整合Mg2+以抑制Dnase的活性；★ 减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈震荡、搅拌等)；★ 避免样品的反复冻融，可将DNA分装保存于缓存液中；★ 所有试剂应用无菌水配制，耗材经高温灭菌；★ 避免DNA的过高温处理等。
    时间： 2022-04-14
    作者： 艾普拜生物
  • 曾令文：核酸生物传感器在重金属离子检测中的应用
    仪器信息网讯 2015年6月17日，&ldquo 第四届中国食品与农产品质量安全检测技术国际论坛暨展览会&rdquo 在北京国家会议中心开幕。此次会议特别设置了&ldquo 食品与农产品中重金属元素和其他有害物质检测&rdquo 、&ldquo 食品与农产品安全微生物检测&rdquo 、&ldquo 饮用水安全检测&rdquo 等九个专题。大会第二天，来自中国科学院广州生物医药与健康研究院曾令文研究员在&ldquo 食品与农产品中重金属元素和其他有害物质检测&rdquo 专题中做了题为&ldquo 核酸生物传感器在重金属离子检测中的应用&rdquo 的报告。 专题现场 中国科学院广州生物医药与健康研究院 曾令文研究员 　　在报告中，曾令文首先介绍了重金属污染的危害、污染源和污染特点。他说，随着工农业生产的迅速发展，食品污染问题越来越严重，重金属是最主要的污染物质之一，会通过食物链的富集最终残留在人体内，对人体的组织器官构成了严重威胁。重金属污染源主要有工业污染、农业污染、生活污染和环境事故污染等。具有不可逆转性、生物积累性、难以降解、生物催化以后毒性会转变等特点。 　　同时曾令文提到，与其他国家相比，我国重金属污染相对比较严重。大气、土壤、水体都存在重金属污染的现象，污染一旦产生，面积会不断扩大。 　　其次，曾令文在报告中详细介绍了目前重金属的检测方法。据他介绍，传统重金属检测方法主要有光谱法、电化学法和基于显色螯合剂的方法等。光谱法主要包括原子吸收光谱法、原子发射光谱法、原子荧光光谱法和分光光度法等方法。光谱法和电化学法需要借助相关的仪器进行检测，具有灵敏度高、特异性好等优点。但是样品处理繁琐、检测成本和技术要求较高，不利于基层单位使用。而基于显色螯合剂的方法具有简便快速、成本低等优点，但是灵敏度不足、其他离子会干扰检测的特异性。 　　为了解决传统方法在检测重金属污染中面临的问题，在曾令文的带领下，课题组研制了两种新型生物传感器，基于核酸酶(DNAzyme)的传感器和基于荧光铜纳米颗粒的荧光传感器，并进行了大量实验验证方法的可行性和灵敏度。据他介绍，两种方法具有以下优点：简单、快速、检测成本较低 降低对仪器的依赖，肉眼即可观察结果 适合在基层实验室或野外使用等。 　　在介绍基于核酸酶(DNAzyme)的传感器在重金属检测中的应用时，曾令文说，该方法在检测重金属离子时主要有两种方法，试纸条法和荧光法。 　　试纸条法中主要制备了Pb2+和Cu2+特异性的DNAzyme检测试纸条，并进行相关实验进行检验。对于Pb2+来说，该方法检测限可以达到10pM，线性范围为10pM-100nM，特异性非常好，不受其他离子干扰，用湖水做回收率分析实验，结果可达88%-106%。对于Cu2+来说，该方法检测限可以达到10nM，特异性分析实验中，铜离子为0.3&mu M，其他离子为3&mu M。 　　荧光法中，主要制备了铜离子检测的荧光传感器和基于比色法检测铜离子的传感器，铜离子检测的荧光传感器的灵敏度可达12.8pM，线性范围是20pM-1&mu M，特异性分析实验中，铜离子为1&mu M，其他离子为10&mu M。基于比色法检测铜离子的传感器，灵敏度可达240nM，线性范围是0.4&mu M-100&mu M，特异性分析实验中，铜离子为10&mu M，其他离子为100&mu M。 　　在介绍基于荧光铜纳米颗粒的荧光传感器在重金属检测中的应用时，曾令文谈道，用该方法检测铅离子，灵敏度为5nM，线性范围为5-100nM，选择性分析实验中，铅离子为0.3&mu M，其他各离子为3&mu M。 　　最后，曾令文总结了基于核酸酶(DNAzyme)的传感器和基于荧光铜纳米颗粒的荧光传感器在进行重金属检测中的优点，并展望了两种方法在未来重金属检测中的应用前景。 　　编辑：张葳
    时间： 2015-06-23
    作者： 张葳
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[/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理悬浮细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集悬浮细胞后，将[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）加入含有[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶的离心管中，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处组织样本呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 研磨[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]100mg[/font][font=宋体]动植物组织后，加入[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]200μL[/font][font=宋体]裂解液和[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液并离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 大肠杆菌或其他细菌呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集细菌后，裂解液或研磨破碎后，每[/font][font=Calibri]100μL[/font][font=宋体]加入[/font][font=Calibri]1~5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 正常推荐稀释比（终浓度）为[/font][font=Calibri]1:1000[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1:20000[/font][font=宋体]，其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 是否用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 是[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 你能减少剂量吗[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 如果你想减少剂量，可以适当提高反应温度或延长反应时间[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应辅因子[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 必须向反应溶液中加入[/font][font=Calibri]2-5mM Mg2+[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应缓冲液[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 常用的生物缓冲液，如[/font][font=Calibri]TBS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MOPS[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]pH6-8[/font][font=宋体]）等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 稀释后每次使用多少？如何测试梯度？一开始多少钱？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 根据不同的实验要求，添加量可以在[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]之间。真核细胞所需的量高于原核细胞，因为真核细胞的核酸含量高，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/1000[/font][font=宋体]的比例添加真核细胞初始添加量，可以按照[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高，因此在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃下消化的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]添加比例高于室温下。普通的[/font][font=Calibri]CoIP[/font][font=宋体]实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]的比例添加对[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]残基要求高的实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何灭活全能核酸酶？如何移除？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性，极端条件下可以引起不可逆的失活，如[/font][font=Calibri]100mM NaOH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃处理[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]。可以通过阴离子交换柱或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性，建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 储存条件[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 储存温度为[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃。储存缓冲液：[/font][font=Calibri]20mM Tris-HCl pH 8.0[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50mM NaCl[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]2mM MgCl2[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]甘油。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 全能核酸酶应用[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、蛋白质提取过程中核酸污染的去除：当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时，全能核酸酶可用于降低样品粘度，以便于操作；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、有效减少储存的外周血单个细胞（[/font][font=Calibri]PBMC[/font][font=宋体]）的聚集；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、有效去除带负电荷核酸对双向[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]蛋白样品的影响；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、在宽范围的条件下（[/font][font=Calibri]6M[/font][font=宋体]尿素、[/font][font=Calibri]0.1M[/font][font=宋体]盐酸胍、[/font][font=Calibri]0.4%Triton X100[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]0.1%SDS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM EDTA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM PMSF[/font][font=宋体]），降解所有形式的（双链、单链、线性、环状）[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序，去除蛋白质产品中的污染；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用，去除粗提液中的核酸，降低溶液粘度，提高蛋白质产量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同级别全能核酸酶，[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级条件下生产的[url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]全能核酸酶[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]SuperNuclease[/b][/url][/font][font=宋体]，无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的药物主文件申报备案（[/font][font=Calibri]DMF Number#:35978[/font][font=宋体]），满足药物申报的规范。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 基因组编辑工具新星---转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)

    http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011121813583277.gifTALE第171位Ser删除后的三维构象模型也显现出非常类似的球状结构，图片篇来自Biochemical Journal, 2004, 382: 725-731.2011年6月，位于美国加利福尼亚州卡尔斯巴德市的生命科技公司(Life Technologies)获得美国伊利诺斯州埃文斯顿市双刀片基金会(Two Blades Foundation)和德国哈雷市马丁-路德大学一组植物学家的独占性许可以便对一种新的基因组编辑技术---转录激活子样效应因子(transcription activator like effector, TALE)进行商业化生产。随着生命科技公司新获得的许可，研究人员可能很快能够从几个设计物TALE商业来源中进行选择。而2011年1月，美国明尼苏达大学和爱荷华州立大学开发的类似技术已被许可给法国公司Cellectis，而且该公司已经提供定制的基因特异性的转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)。与此同时，几个研究小组就像学术界之前对ZFN那样正在建立大众都可获取的TALEN来源。当然，现在预测利用只在2007年发现的TALE进行基因组编译的最终影响仍嫌过早。相反，ZFN技术开发了将近15年，并且已经正在人临床试验中进行测试。但是这两种技术的差别是显而易见的。不同于ZFN---该技术的知识产权是由Sangamo生物技术公司和它的商业伙伴Sigma-Aldrich所有，TALE的使用、成本和可获得性则是完全不同的情形。TALEs首先是植物病原菌黄单胞菌(Xanthomonas)上发现的，特异性地结合到DNA，在该病原菌感染过程中对植物基因进行调控。

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