推荐厂家
暂无
暂无
染色技术由于微生物细胞含有大量水分(一般在80-90%以上),对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,与周围背景没有明显的明暗差。所以,除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外,绝大多数情况下都必须经过染色后,才能在显微镜下进行观察。但是,任何一项技术都不是完美无缺的。染色后的微生物标本是死的,在染色过程中微生物的形态与结构均会发生一些变化,不能完全代表其生活细胞的真实情况,染色观察时必须注意。 本节包括四部分: 一、染色的基本原理 二、染料的种类和选择 三、制片和染色的基本程序 四、染色方法
一、染色注意事项 1.染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法,不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2.染色过程中所用的时间要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的,染色时间就要短,反之时间就长。 3.伊红有水溶的和醇溶的,如果用的是水溶的,应该在脱水前进行染色,如果是醇溶的,应使用与溶解伊红等浓度的酒精开始脱水。 4.在二甲苯脱蜡之前可以先在60℃烤箱内0.5~1小时,这样可以使切片粘附更牢固不易脱片,也有利于脱蜡。 5.二甲苯在HE染色中有脱蜡、透明的作用。二甲苯脱蜡的好坏主要取决于切片在二甲苯内放置的时间和脱蜡时的温度以及二甲苯的使用次数。染好的切片必须经过透明,有利于显微镜观察,同时并为封片起到了桥梁作用。 6.用梯度酒精脱水时,在低浓度酒精中时间不宜过长,到高浓度时逐步延长脱水时间。以免脱水不彻底,影响二甲苯透明的效果。 7.在酸性分化液内停留的时间不要过长,分化不可过度,避免使细胞核内该染上色的结构脱色。不需分化处理的苏木精染色时要注意掌握染色时间,以防止组织切片染色背景过深或细胞核、胞质染色不足。
俗话说,每一个伟大的男人背后,都有一个伟大的女人。每一个精子的背后,也有一个X染色体在起作用。在人体中,Y染色体决定人的性别为男性,因此许多研究人员认为:男性发育过程中负责决定性别的相关基因都位于Y染色体上。但是现在有一个科研团队发现,X染色体(“女性染色体”)也可以在此过程中发挥重要的作用。X染色体包含了决定成为精子形成的大量的基因。这一发现改变了我们对性别形成的固有想法,至少在某种程度上X染色体在进化过程中扮演一个令人意外的角色。哺乳动物有一对性染色体。女性的X染色体有两个拷贝,男性有一个拷贝,与Y染色体形成对。而人体只需要X染色体一个拷贝发挥作用,所以在女性体内,第二个拷贝是被“关闭”的。约50年前,遗传学家Susumu Ohno提出,这样的关闭作用减缓了X染色体的进化进程,所以大多数哺乳动物中的X染色体都非常相似。剑桥大学怀特海德生物医学研究所的遗传学家David Page研究了经过80亿年的进化后,上述说法是否在老鼠和人类之间成立,Page和同事得到的研究结果发表在近日的 Nature Genetics杂志上。虽然这两个物种的基因组已经被解码,但这些DNA序列还存在一些缺陷和错误,特别是X染色体的缺陷和错误首先需要被填充和修复。Page的研究团队使用一个特殊的测序技术确定了缺口处的DNA碱基序列,这里包含很多的重复的DNA区域,而此前用现有的技术通过一次测序很难破译这些重复区域。然后,研究人员比较了小鼠和人类的X染色体基因。这两个物种的X染色体共同拥有800个左右的基因,这些共享基因,通常是是男性和女性相对稳定的基因,并且它们以单拷贝的形式存在。这些基因上发生的突变,能引发X-连锁隐性遗传病,例如血友病和杜氏肌营养不良症。与此同时,研究团队也发现了相较前人研究该染色体与众不同的、令人迷惑的一面。人类有144个X染色体基因是小鼠所没有的,而有197个基因是个小鼠基因是特有的。人类的144个基因中,有107个存在于X染色体重复序列中,这些基因的变化较为迅速。基于这样的证据,Page得出结论,在人类和老鼠祖先产生分离的时候,这些基因分化就出现了。“对于人类X染色体和老鼠X染色体上存在如此大量的非共享基因,我感到非常惊讶,” 密歇根大学的进化遗传学家Jianzhi Zhang说。这一发现表明,X染色体上基因可能随时都在变化。基因改变时,就会影响进化,Page认为X染色体基因效用可能是特别强劲的。例如,一些先前发现的X染色体基因,似乎已经在小鼠的形态发育上发挥了作用。他和他的同事调查了八个人类男性和女性的身体组织来观察X染色体基因如何发挥作用。“在许多情况下,这些非共享的基因在女性体内甚至没有表达,” Page说。相反,它们在决定精子形成的睾丸却表现得非常活跃。“我们认为X染色体过着双重的生活,” 其一,它是稳定的,像前人研究描述的一样;其二,它在不停变化并影响男性特征。Page表示,在其它基因上,重复区域在治疗癌症和其他疾病中已经具有了巨大的生物医学意义,他希望其他研究人员能进一步探索X染色体的重复区域是否同样重要,特别是在男性的繁衍和睾丸癌治疗方面。但目前,我们必须先知道这些基因的功能,了解它们对健康和形态的影响。但有一件事是肯定的,人们将开始关注X染色体的进化。http://www.ibioo.com/data/attachment/portal/201307/23/202226bu6vaasv3g6lwfs0.jpg参考文献http://www.ibioo.com/data/attachment/portal/201307/23/202226i11s7d9xysyswvvy.gifIndependent specialization of the human and mouse X chromosomes for the male germ line作者:Jacob L Mueller et al. We compared the human and mouse X chromosomes to systematically test Ohno's law, which states that the gene content of X chromosomes is conserved across placental mammals1. First, we improved the accuracy of the human X-chromosome reference sequence through single-haplotype sequencing of ampliconic regions. The new sequence closed gaps in the reference sequence, corrected previously misassembled regions and identified new palindromic amplicons. Our subsequent analysis led us to conclude that the evolution of human and mouse X chromosomes was bimodal. In accord with Ohno's law, 94–95% of X-linked single-copy genes are shared by humans and mice; most are expressed in both sexes. Notably, most X-ampliconic genes are exceptions to Ohno's law: only 31% of human and 22% of mouse X-ampliconic genes had orthologs in the other species. X-ampliconic genes are expressed predominantly in testicular germ cells, and many were independently acquired since divergence from the common ancestor of humans and mice, specializing portions of their X chromosomes for sperm production.