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流式细胞胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中,每秒钟能测量数千个至数万个细胞,能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析,带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞,用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使其具有了更好的单色性与激发[/
[font=宋体]流式细胞分析是一种在生物学和医学领域广泛应用的实验技术,它可以实现对细胞群体的快速、准确分析和分类。本文将详细介绍流式细胞分析的步骤和流式免疫检测的应用,帮助读者全面了解这一技术的原理、方法和应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]流式细胞分析方案主要分为[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个步骤: [/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备:应通过机械分离方法或化学解离技术制备单细胞悬液,如采用酶溶液或钙螯合试剂。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②封闭:通常采用抗[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]抗体稀释液悬浮细胞,防止一抗非特异性结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③抗体孵育:流式细胞分析的孵育步骤涉及多种组分,包括一抗、二抗、链霉亲和素和荧光染料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④流式细胞仪检测:将处理后的细胞通过流式细胞仪进行检测和分析,获取细胞的各项指标数据。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]适当的对照[/b][/font][font=宋体]除了目标细胞之外,每次进行流式细胞实验还应包含以下对照:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]至少一份未染色样品,与试样同时进行每一步的缓冲液孵育,以优化实验的流速和电压。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一份适当的阴性对照样品,与试样基本相同,但用在一抗的宿主种属中生产的同型对照替代试样中的一抗。该对照用于非特异性结合二抗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如有需要也可准备一份已知表达所有目标抗原的细胞组成的阳性对照,并与试样共同孵育,但仅用单色检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]流式免疫检测方法与应用[/b][/font][font=宋体]同其他免疫检测应用一样,流式细胞分析也可通过多种方法利用抗体探测特定的细胞基元。两大常用方法为:直接检测法和间接检测法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]直接检测法[/font][font=宋体][font=宋体]直接检测法采用一步染色工艺,仅需一抗即能特异性结合目标抗原,无需额外步骤,可直接与支持成像或其他结合状态检测的分子结合。在探测细胞表面抗原时,应避免固定细胞,因为固定可能导致抗体探针无法与目标抗原充分接触。因此,保持细胞活力对于数据采集至关重要。若需查找适用于直接检测法的抗体,推荐使用[/font][font=Calibri]Antibody Explorer[/font][font=宋体]抗体搜索工具,将搜索范围限定为“仅限一抗”,并将应用选择为“流式细胞分析”。这样,您将能够快速找到适合您实验需求的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]间接检测法[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]间接检测法首先使用纯化抗体与目标抗原进行结合,然后使用荧光染料标记的二抗(能够特异性靶向一抗的宿主同型)与一抗进行特异性结合,形成一抗[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]荧光二抗复合物。通过将纯化的一抗与各种波长(或颜色)的荧光染料标记的二抗(特异性针对产生一抗的宿主同型)进行搭配,可以增强抗体库的模块化程度。这种方法能够提高实验的灵敏度和特异性,同时减少背景干扰和误差。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测技术服务[/url],其优势:[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①具有 [/font][font=Calibri]20,000 [/font][font=宋体]次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验,在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②拥有 [/font][font=Calibri]1,000 [/font][font=宋体]余株自产精品流式抗体,覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③自产 [/font][font=Calibri]Annexin V/7-AAD [/font][font=宋体]凋亡检测试剂盒,并储备多种流式检测常用试剂,大大节约购买试剂的等待时间和实际费用;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④可以提供近 [/font][font=Calibri]200 [/font][font=宋体]种细胞系选择,省去细胞样本寄送过程中的风险,并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font]
本课程小而精,是一块生物分析技术的重要拼图,短短7分钟的时间,一站式解答流式细胞分选技术的各种关键疑问,帮助你建立起对流式细胞分选术的整体认知。本课程主要涉及流式细胞分选技术的目的、注意事项、分选仪的