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作为科研生产中最重要的基础性资源—菌毒种,其收集、保藏及相关的研究工作在我国正处于整理、整合以及全方面逐步正规化阶段.2003年7月23日,科技部在北京召开了“国家科技基础条件平台建设”部际联席会和专家顾问组成立大会,正式启动了国家科技基础条件平台建设工作.国家自然科技资源共享平台建设作为其中的一个重要组成部分同步启动.作为该项8的一个重要组成部分,微生物菌种资源整理、整合工作同期启动,在此项工作中,中国兽医药品监察所承担了兽医微生物资源整理、整合工作.本所在行业内发展了数家加盟单位,在整理、整合菌种资源的过程中遇到了一些实验室细菌鉴定结果出现偏差的问题.经分析调查,多是由于实验室人员结构以及实验室的硬件水平差别较大等原因,造成实验室间鉴定能力的参差不齐,致使鉴定项目完成情况不尽相同,细菌鉴定结果出现偏差. 细菌鉴定是指将分离培养获得的病原菌,通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度,继而进行系统鉴定.而菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种时,应在开启后经过两代的适应性培养方可进行复核性的系统鉴定.系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群).目前菌种保藏机构通常使用的细菌鉴定方法大致有以下几种:
本人刚刚接触菌种,有好多不明白,想请教各位老师1.菌种从冻干粉激活后,转接培养基液体石蜡保存,-20℃可以保存多久?这个应该算第几代?2.以后从这个液体石蜡中挑取部分菌苔出来做传代,其余部分是否可以继续保存?3.甘油保存法和液体石蜡保存法那个更好?保存期更长?
1、简述菌种的传代系装菌种在使用一段时间后,菌种数量减少,将菌种进行传代培养,增加数量经多次传代后,菌种有衰退、变异现象,对菌种进行复壮,得到纯化菌种。2、菌种传代2.1 仪器及培养基酒精灯、接种环、营养琼脂培养基。2.2 操作步骤2.2.1 将新鲜的无菌斜面琼脂养基、酒精灯、接种环和将要传代的菌种管均放置于洁净工作台上,备用。2.2.2 点燃酒精灯,以左手持菌种管,右手持接种环,将接种环通过火焰消毒俟冷后,从菌种管中挑取菌落。2.2.3 左手立即换取斜面培养基管,以右手无名指和小指拔取棉塞(先转动棉塞后拔去),夹持于手指间。2.2.4 立即将管口通过火焰灭菌后将接种环伸入斜面管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上蜿蜒涂布。2.2.5 轻轻取出接种环,用棉塞塞住管口,立即将接种环通过火焰消毒。2.2.6 将接种好的管口用牛皮纸包位,置于35±2℃恒温箱中培养18-24小时,取出置4-6℃冰箱中保存。3、菌种复壮3.1 仪器及培养基酒精灯、接种环、曙红亚甲蓝琼脂培养。3.2.1 菌种在经过几次传代之后,对其进行革兰氏染色、镜检。3.2.2 染色、镜检后若发现菌种有退化、变异现象,则将其划线接种在相应的培养基平板上,于35±2℃培养18-24小时后,观察生长菌的形态特征。3.2.3 挑取具有典型特征的菌落再次进行划线接种培养后进行革兰氏染色、镜检。3.2.4 选择特征明显,生长良好的菌种,将其接种于营养琼脂培养基斜面,培养后置冰箱中保存。