推荐厂家
暂无
暂无
[font='calibri'][size=13px]什么是重组抗体?重组抗体的优势介绍[/size][/font]与传统抗体相比,重组抗体具有几个关键优势。这些包括良好的批次间一致性,持续供应以及对抗体工程的适应性. 因此,重组抗体在科学研究中的应用日益广泛,特别是作为解决持续存在的可重复性难题的一种手段。什么是重组抗体?传统的多克隆和单克隆抗体是正常 B 细胞发育和基因重组的产物。它们是通过用抗原免疫动物以引发免疫应答而产生的。多克隆抗体由许多不同的 B 细胞克隆分泌并识别多个抗原表位,而单克隆抗体则来自单个 B 细胞克隆,并且仅对单个表位具有特异性。重组抗体是单克隆抗体,但是其生产涉及体外遗传操纵。将抗体基因克隆到表达载体中后,将其转染到合适的宿主细胞系中进行抗体表达。哺乳动物细胞系最常用于重组抗体的生产,然而细菌、酵母或昆虫来源的细胞系也适用。①良好的批次间一致性由于重组抗体的生产涉及对抗体轻链和重链进行测序,因此这是一个高度可控且可靠的过程。相反,用于生产单克隆抗体的基于杂交瘤的系统容易发生遗传漂移和不稳定,从而增加了批次间变异或抗体表达缺失的可能性。重组抗体在批次之间高度一致,从而确保了可重复的实验结果。②可规模化体外生产抗体的方法适合大规模生产,这意味着抗体的可获得性不太可能成为限制因素。此外,由于重组抗体序列是已知的,因此确保了供应的连续性;如需将抗体用于大规模长期研究,这可能就是一个至关重要的因素。③顺应工程化了解抗体的肽序列为工程化提供了许多机会。这些包括同种型转换(也称为类转换)和种属转换,这两种方法都可以通过允许在实验中利用那个同种型或种属特定的二抗来增加多重实验的范围。工程学的进一步应用是使用体外抗体选择系统(例如抗体噬菌体展示)来改善抗体特异性。④无动物源性生产与传统的抗体生产方法不同,重组方法避免了使用动物的需要。多克隆抗体直接从免疫宿主血清中纯化,单克隆抗体从杂交瘤来源的组织培养上清液 (TCS) 或腹水中纯化,而重组抗体是从转染宿主细胞系的 TCS 中纯化。无论抗体是多克隆抗体、单克隆抗体还是重组抗体,在实验使用前都必须在预期应用中对其进行适当验证。在CST,我们遵守抗体验证标志,即在任何特定实验方法中的确定抗体特异性、敏感性和功能性的六个互补策略通过针对每种抗体产品精心定制这些策略,我们保证 CST 抗体适合用于帮助您获得可信赖的结果。[align=center][img=大规模重组抗体生产服务,690,191]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305241528536465_2058_5907840_3.png!w690x191.jpg[/img][/align]义翘神州已通过ISO9001认证,在规模化生产重组单克隆抗体方面积累了丰富的经验。我们拥有完善的大规模重组抗体表达生产平台,可提供从毫克级到公斤级重组抗体生产服务,满足客户高通量、大规模的生产要求。更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service][b]大规模重组抗体生产服务[/b][/url]详情尽在:https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service
[font=宋体][font=宋体]重组蛋白([/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体])是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因([/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]),连接到适合的表达载体,导入到特定的宿主细胞,利用宿主细胞的遗传系统,表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]:原核表达系统:最常用的大肠杆菌蛋白表达,真核表达系统如酵母,哺乳动物细胞蛋白表达(常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体])及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生,产生的重组蛋白作为生物制药的产物,在医学中作用显著。利用基因工程技术,可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例:其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前,重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分,常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时,蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外,每个表达系统都有其独特的优势和挑战,这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议,以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]
重组子可通过酶切进行鉴定,也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定,阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中,37℃摇 床培养过夜。2. 次日取菌液 0.2-0.5ml,13,000rpm×3min 离心,弃上清,加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿,震荡混匀,13,000rpm×5min 离心。3. 取上清进行琼脂糖电泳,加入载体质粒 DNA 作为阴性对照,根据质粒大小 初步筛选重组子,重组子的泳动速度应该慢于载体质粒。4. 用碱法小量制备可能是重组子的质粒 DNA。5. 选取适当的酶,对重组子进行酶切分析,酶切体积均为 10μl 体系。酶切样品 进行琼脂糖电泳鉴定是否有所需片段。6. 酶切分析正确的重组子分成两份,一份进行测序反应,另外一份保种。7. 若用 PCR 法鉴定,则在第 2 步时每个样本取 0.5-1.0μl 菌液为模板进行 PCR 反应,每管反应体系最低可少至 10μl ,PCR 产物电泳,能得到所需条带的样 本进一步提取质粒酶切鉴定或送样品测序。