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[color=#444444]各位朋友哪位能给提供一份柠檬黄、诱惑红的液相检测方法,谢谢![/color]
随着标准的更新,GB 5009.35-2016中将诱惑红剔除出了该检测方法,而现行有效的GB 5009.141-2016中采用纸色谱进行分离,分光光度法进行定量,对比两个方法,前处理的原理相近,检测手段发生了改变,因此,有几点疑惑想和各位老师探讨一下:(1)纸色谱与液相色谱相比,有哪些优缺点;(2)液相色谱测定诱惑红有哪些不足之处;(3)您会继续使用液相法测定诱惑红,还是采用新标准中的纸色谱进行分离,分光光度法进行测定。[color=#3f5e09][b]SN/T 1743-2006 食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测 高效液相色谱法 该标准目前还是现行有效的[/b][/color]
[align=center][b]食品中的诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测[/b][/align][align=center][b]高效液相色谱法方法验证报告[/b][/align][align=center][b]SN/T 1743-2006[/b][/align][align=center][b]牛晓[/b][/align]一、方法概述适用范围:本标准适用食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的液相色谱检测方法。原理:糖果、饮料中的人工合成着色剂用聚酰胺吸附法提取,过滤后,采用反相高效液相色谱技术进行分离测定,外标法定量。二、仪器与试剂1.仪器:1.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器。1.2天平:感量位0.001g和0.00001g。1.3涡旋混匀器。1.4 离心机:最大转速1000r/min。2. 试剂2.1聚酰胺粉:200目。2.2乙醇-氨溶液:取1mL氨水,加入100mL乙醇中70%。2.3甲醇-甲酸溶液:取60mL甲醇和40mL甲酸混匀。2.4 20%柠檬酸溶液,取200g柠檬酸溶液于1L水中 。2.5硫酸:10mL硫酸和100mL水混匀。2.6 10%钨酸钠水溶液:取10g钨酸钠溶解于100mL水中。2.7乙酸:色谱纯。2.8甲醇:色谱纯。2.9乙酸铵。2.10诱惑红标准品 来源:Dr.Ehrenstorfer GmbH 货号:C10125000三、样品的制备与保存3.1试样制备:从抽取得原始样品中取可食部分,均匀捣碎,液体样品混匀,将样品充分混匀,分出约500g,作为试样,装入清洁容器中,标明标记。3.2试样保存,将试样冷藏保存。3.3在抽样和制样过程中,必须防止样品收到污染。四、分析步骤4.1、标准曲线绘制4.1.1日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红标准品:纯度>98%。4.1.2标准储备溶液:准确称取10.0mg诱惑红标品置于10mL容量瓶中,加pH为6的水到刻度,配成水溶液1000.0μg/mL。4.1.3标准工作液:准确移取储备液2.5μL、5.0μL、10.0μL、25.0μL、50.0μL、100.0μL、250.0μL于10mL容量瓶中,用水稀释并定容至刻度,配成成浓度为0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL系列工作液。4.2样品的处理4.2.1提取:4.2.1.1果汁和汽水等样品:取50mL样品加热,驱除二氧化碳,然后用水稀释定容经0.45μm滤膜过滤后供液相色谱分析。4.2.1.2固体类样品:取已粉碎样品10g,加30mL乙醇-氨溶液溶解,置水浴上浓缩至20mL,用20%柠檬酸溶液调pH3.5-4.5,如需可加1mL10%钨酸钠溶液,使蛋白质沉淀,将上述溶液加热至70℃,加入聚酰胺粉1.0g,充分搅拌,用20%柠檬酸溶液调pH3.5-4.5,使色素完全被吸附,以3000r/min,离心3min,弃去离心后所得的上层清液,用甲醇和甲酸溶液洗去天然色素,再用水洗至溶液为中性,最后用乙醇-氨水溶液解析,至吸附剂为白色,收集解析液,加乙酸中和,定容至100mL,经0.45μm滤膜过滤后供液相色谱分析。4.3.仪器测定条件4.3.1色谱柱:XBP-C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒径5.0μm。4.3.2流速:1.0mL/min。4.3.3柱温:30℃。4.3.4检测波长:254nm。4.3.5流动相A相:甲醇 B相:0.02mol/L乙酸铵溶液。[table][tr][td]时间/min[/td][td][align=center]A%(甲醇)[/align][/td][td][align=center]B%(0.02mol/L乙酸铵)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]95[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]10[/align][/td][td][align=center]20[/align][/td][td][align=center]80[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]18[/align][/td][td][align=center]60[/align][/td][td][align=center]40[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]25[/align][/td][td][align=center]60[/align][/td][td][align=center]40[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]25.01[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]95[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]40[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]95[/align][/td][/tr][/table]五、结果处理计算公式:[align=center][img=,279,75]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281438514542_5819_2904018_3.png!w279x75.jpg[/img][/align]式中:X-样品中诱惑红的含量,单位为g/L;C-由标准曲线查得试样中诱惑红的浓度为μg/mL;V-试样溶的总体积,单位为mL;V1-样品移取体积,单位为mL;六、验证结果1.线性结果将标准系列工作溶液注入液相色谱仪中, 测定相应的峰面积,以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。同时做空白实验。[u]Y=0.1084*X+06039R^2=0.9995[/u][align=center][img=,690,510]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281436598072_7433_2904018_3.png!w690x510.jpg[/img][color=#ffc000] [/color][/align]以上结果表明诱惑红在1.0μg/mL~25.0μg/mL范围内,R[sup]^2[/sup]=0.9995,诱惑红浓度和峰面积呈线性关系,线性良好,符合要求。2.检出限结果将5.0μg/mL标准溶液逐级稀释至S/N=2.0,得出诱惑红的检出限为1.0mg/kg[color=#ff0000],[/color]此检出限结果小于国标SN/T 1743-2006的定量检出限2.5mg/kg,故此方法满足条件。七、方法精密度(重复性)对LBF180700284样品分别进行6次加标重复性的测定,测定结果如下:[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]取样量(mL)[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]浓度(μg/mL)[/align][/td][td][align=center]6.1593[/align][/td][td][align=center]6.1804[/align][/td][td][align=center]6.1888[/align][/td][td][align=center]6.0971[/align][/td][td][align=center]6.1529[/align][/td][td][align=center]6.147[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]含量(g/L)[/align][/td][td][align=center]0.00616[/align][/td][td][align=center]0.00618[/align][/td][td][align=center]0.00619[/align][/td][td][align=center]0.00610[/align][/td][td][align=center]0.00615[/align][/td][td][align=center]0.00615[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]平均值(g/L)[/align][/td][td=6,1][align=center]0.00615[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]RSD%[/align][/td][td=6,1][align=center]0.53[/align][/td][/tr][/table]本方法的精密度为0.53%,符合SN/T 1743-2006中给出试样测试结果的精密度要求,因此,本次测定均符合要求。八、准确度验证(加标回收)对LBF180700284样品加标,取1000.0 μg/mL的标液0.25mL、0.30 mL、0.40mL同样品同步处理后,结果见下表:[table][tr][td=2,1][align=center]测定编号[/align][/td][td=6,1][align=center]诱惑红[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]序号[/align][/td][td][align=center]V1( mL )[/align][/td][td][align=center]V(mL)[/align][/td][td][align=center]C(μg/mL)[/align][/td][td][align=center]诱惑红含量(g/L)[/align][/td][td][align=center]平均值( g/L )[/align][/td][td][align=center]加标量( g/L )[/align][/td][td][align=center]回收率%[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1#[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]ND[/align][/td][td][align=center]ND[/align][/td][td=1,2][align=center]ND[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2#[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]ND[/align][/td][td][align=center]ND[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标1#[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]4.9280[/align][/td][td][align=center]0.00493[/align][/td][td][align=center]0.00493[/align][/td][td][align=center]0.00500[/align][/td][td][align=center]98.6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标2#[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]5.9642[/align][/td][td][align=center]0.00596[/align][/td][td][align=center]0.00596[/align][/td][td][align=center]0.00600[/align][/td][td][align=center]99.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标3#[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]8.2935[/align][/td][td][align=center]0.00829[/align][/td][td][align=center]0.00829[/align][/td][td][align=center]0.00800[/align][/td][td][align=center]103.6[/align][/td][/tr][/table]由上表可以看出脱氢乙酸在添加浓度0.00500g/L-0.00800g/L范围内,回收率在98.6%-103.6%之间相对标准偏差为2.69%,小于国标要求应小于10%,符合规定要求。九、总结从检出限、线性范围、重复性、回收率测试结果可知,均符合方法要求,本实验方法符合SN/T 1743-2006的要求。