地黄苷

大黄是治疗便秘、炎症和癌症等常用的中药之一。正品大黄主要通便成分为番泻苷（双蒽酮类）和蒽醌苷。与正品大黄相比，非正品大黄蒽醌含量较低且不含番泻苷，因此通便效果较差。但非正品大黄二苯乙烯类化合物含量较高，如土大黄苷，它可降低血液中糖脂水平，用来治疗高血脂、肥胖症和糖尿病。依据中国药典，正品大黄中不应检测出土大黄苷。然而，实际使用中存在以非正品大黄代替正品大黄的现象，从而影响中成药的疗效，因此，建立中成药中土大黄苷的分析检测方法具有重要现实意义。 中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室研究员师彦平带领的药物化学成分研究组首次合成磁性分子印迹聚合物用于中成药样品中土大黄苷的分析检测。 研究人员使用四氧化三铁作为磁性载体、土大黄苷作为模版分子、丙烯酰胺作为功能单体、苯乙烯作为共聚物单体、乙二醇二(甲基丙烯酸)酯作为交联剂，通过悬浮聚合合成了磁性分子印迹聚合物，并对其进行了一系列表征。随后，将该聚合物作为吸附剂用于中成药样品中土大黄苷的选择性萃取。结果表明，该聚合物对模版分子（即土大黄苷）呈现出较高的吸附性和选择性。土大黄苷在四种临床用中成药中的含量分别是11.84，3.35，4.47和7.57 µg g−1，加标回收率在77.82%和91.00%之间。通过较短的萃取过程就可实现吸附解吸平衡，之后使用外部磁场便可轻易回收该聚合物。 该方法对土大黄苷呈现出良好的选择性，可用于测定中成药中的土大黄苷，较高的回收率证明其可适用于不同中成药中土大黄苷的分析。 以上工作得到了国家自然科学基金的支持。研究结果发表在近期出版的Journal of Chromatography A(Journal of Chromatography A,1252 (2012) 8-14)。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121101375590745524.jpg用于测定中成药中土大黄苷的磁性分子印迹聚合物

[size=15px][font=宋体][color=black]传统化疗药物[/color][/font][font=&][color=black]5-[/color][/font][font=宋体][color=black]氟尿嘧啶（[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]）一直是临床上最常用的化疗药物之一。由于其细胞杀伤特异性较低，给药后常出现明显的不良反应，其中骨髓毒性最为显著。前期研究表明，中草药来源的天然化合物地黄苷（[/color][/font][font=&][color=black]Martynoside[/color][/font][font=宋体][color=black]，[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]）具有造血活性，可在体内外减轻[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]对的细胞毒性，且不会干扰[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]体内抗肿瘤活性。然而，[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]的直接分子靶点尚未见报道，[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]的作用机制也知之甚少。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size][size=15px][font=&][color=black]2023[/color][/font][font=宋体][color=black]年[/color][/font][font=&][color=black]8[/color][/font][font=宋体][color=black]月[/color][/font][font=&][color=black]15[/color][/font][font=宋体][color=black]日，西湖大学孙仁教授及浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所杜雨棽研究员团队在[/color][/font][font=&][color=black]Science Bulletin[i][/i][/color][/font][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font=&][color=black]IF=18.8[/color][/font][font=宋体][color=black]）发表题为[/color][/font][font=&][color=black]“Martynoside rescues 5-fluorouracil-impaired ribosome biogenesis by stabilizing RPL27A”[/color][/font][font=宋体][color=black]的文章，确定了[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]是[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]的功能性细胞靶标。机制上，[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]通过直接结合[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]，增加其蛋白稳定性来减弱[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]诱导的[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白水平降低，缓解[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]抑制的核糖体生物合成，从而促造血功能。 [img=,690,392]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409101445247404_7631_6561489_3.png!w690x392.jpg[/img] [/color][/font][/size][size=15px][b][font=&][color=#0070c0]1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、地黄苷的靶蛋白[/color][/font][font=&][color=#0070c0]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]的确定[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][size=15px][font=宋体][color=black]为了鉴定[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]在细胞内的蛋白靶点[i][/i]，研究人员应用了最近开发的[/color][/font][font=&][color=black]md-LED[/color][/font][font=宋体][color=black]技术（该技术整合人类外显子文库，[/color][/font][font=&][color=black]mRNA[/color][/font][font=宋体][color=black]展示技术和高通量测序技术）。在排除对照组的非特异结合蛋白后，选择了[/color][/font][font=&][color=black]5[/color][/font][font=宋体][color=black]个蛋白（[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]POM121L12[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]CTSG[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]CARD6[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]MMAA[/color][/font][font=宋体][color=black]）进一步[/color][/font][font=&][color=black]Pulldown[/color][/font][font=宋体][color=black]验证，发现[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]与[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]存在互作，并通过[/color][/font][font=&][color=black]ITC[/color][/font][font=宋体][color=black]实验证实了[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]与[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]特异性结合，分子对接以及蛋白点突变后的[/color][/font][font=&][color=black]Pulldown[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]ITC[/color][/font][font=宋体][color=black]实验确定了结合能力及关键结合位点，结果表明[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]与[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]的[/color][/font][font=&][color=black]R87[i][/i][/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]K116[/color][/font][font=宋体][color=black]关键残基直接结合 [/color][/font][/size][size=15px][b][font=&][color=#0070c0]2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]MAR[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]阻断[/color][/font][font=&][color=#0070c0]K92[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]和[/color][/font][font=&][color=#0070c0]K94[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]的泛素化逆转[/color][/font][font=&][color=#0070c0]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]诱导的[/color][/font][font=&][color=#0070c0]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]蛋白降低[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][size=15px][font=宋体][color=black]之前的研究发现[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][/size][font=宋体][color=black][back=url(&]治疗严重损害造血功能，减少骨髓健康指标[/back][/color][/font][font=&][color=black][font=宋体]BMNCs[/font][/color][/font][font=宋体][color=black][back=url(&]（骨髓有核细胞）数量，而[/back][/color][/font][font=&][color=black][font=宋体]MAR[/font][/color][/font][font=宋体][color=black][back=url(&]增加了[/back][/color][/font][font=&][color=black][font=宋体]5-FU[/font][/color][/font][font=宋体][color=black][back=url(&]处理的小鼠的[/back][/color][/font][font=&][color=black][font=宋体]BMNCs[/font][/color][/font][font=宋体][color=black][back=url(&]数量。[/back][/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][size=15px][font=宋体][color=black]在本研究中，作者进一步检测了[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]在体内对[/color][/font][font=&][color=black]BMNCs[/color][/font][font=宋体][color=black]中[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白和[/color][/font][font=&][color=black]mRNA[/color][/font][font=宋体][color=black]表达的影响，发现[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]引起[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白丰度的急剧降低，而[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]的联合给药部分恢复了[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白水平，但不上调其[/color][/font][font=&][color=black]mRNA[/color][/font][font=宋体][color=black]表达。此外，前期[/color][/font][font=&][color=black]BMNCs[/color][/font][font=宋体][color=black]的[/color][/font][font=&][color=black]RNA-Seq[/color][/font][font=宋体][color=black]数据验证了[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]处理后[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A mRNA[/color][/font][font=宋体][color=black]表达没有变化。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size][size=15px][font=宋体][color=black]接着，在体外细胞模型中测试[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]的药效之前，作者通过质谱评估了[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]穿透细胞的能力，发现[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]可以穿透细胞，特别是细胞核，与[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]互作。[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]诱导的[/color][/font][font=&][color=black]BMNC[/color][/font][font=宋体][color=black]损伤的体外模型显示，与体内数据一致，[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]减弱了[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]引起的[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白丰度的降低，但不上调其[/color][/font][font=&][color=black]mRNA[/color][/font][font=宋体][color=black]表达（图[/color][/font][font=&][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black]）。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size][img=图片,1,]data:image/svg+xml,%3C%3Fxml 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MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]逆转[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]诱导的[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白降低，但不影响[/color][/font][font=&][color=black]mRNA[/color][/font][font=宋体][color=black]表达[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size][size=15px][font=宋体][color=black]为了确定[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]逆转[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]诱导的[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白降低是通过特定相互作用发生的，作者突变了[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]，发现[/color][/font][font=&][color=black]MAR[/color][/font][font=宋体][color=black]部分逆转了[/color][/font][font=&][color=black]5-FU[/color][/font][font=宋体][color=black]诱导的野生型细胞的蛋白减少，而不能逆转[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]突变体细胞（[/color][/font][font=&][color=black]K116Y-RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=black]）。总之，体内和体外的数据都表明[/color][/font][font=&][color=black]RPL27A[/color][/font][font=宋体][color=bla